馬立克病（Marek’s disease, MD）是由馬立克病病毒（Marek’s disease virus, MDV）引起的以單核細(xì)胞浸潤(rùn)為特征并誘發(fā)各個(gè)器官出現(xiàn)淋巴瘤的高度傳染性疾病,并造成免疫抑制,引起繼發(fā)感染,給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隨著MDV-1多個(gè)毒株基因全序列測(cè)序完成,人們對(duì)MDV-1的生物學(xué)特性有了進(jìn)一步了解,同時(shí)推測(cè)出新的開放閱讀框（Open Read Frame, ORF）,為從分子水平研究MDV的生物學(xué)特性拓寬道路。本論文以CVI988/Rispens基因組為基礎(chǔ)著重鑒定部分MDV-1特有的新ORF是否為蛋白編碼基因,為研究馬立克病毒致病機(jī)制、致瘤機(jī)制、毒力致弱機(jī)制及其疫苗免疫機(jī)制等奠定基礎(chǔ)。從推測(cè)的70個(gè)新ORF中選擇能編碼大于100aa的MDV-1特有的新ORF,有ORF1.0/ORF80.0、ORF5.6/ORF75.9、ORF89.5、ORF91.5和ORF97.3復(fù)合要求,通過DNAstar軟件進(jìn)行抗原性分析并設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增選定的新ORF。通過RT-PCR方法初步篩選能在接毒CVI988/Rispens的雞胚成纖維細(xì)胞（Chicken Embryo ... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略表
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述及選題目的和意義
    1 馬立克病研究進(jìn)展
        1.1 病原學(xué)
            1.1.1 病毒形態(tài)
            1.1.2 血清型分型
            1.1.3 MDV理化性質(zhì)
        1.2 馬立克病毒基因組的研究進(jìn)展
            1.2.1 全基因測(cè)序情況
            1.2.2 已經(jīng)鑒定的主要基因及其編碼蛋白的基本功能
            1.2.3 MDV-1強(qiáng)弱毒株之間的主要差異性基因
        1.3 流行病學(xué)和致病機(jī)理
            1.3.1 流行病學(xué)
            1.3.2 致病機(jī)理
        1.4 臨床癥狀、病理變化及疾病的診斷與防控
            1.4.1 臨床癥狀
            1.4.2 病理變化
            1.4.3 疾病的診斷與防控
    2 選題的目的及意義
第二章 試驗(yàn)部分
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 雞胚和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 病毒、宿主菌及菌體
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑
        1.5 試劑配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 新ORF初步篩選及引物設(shè)計(jì)
        2.2 CVI988/Rispens復(fù)蘇及病毒PFU的測(cè)定
            2.2.1 CEF的制備
            2.2.2 復(fù)蘇CVI988/Rispens
            2.2.3 PFU的測(cè)定
        2.3 新ORF基因的初步鑒定
            2.3.1 總RNA的提取
            2.3.2 總RNA反轉(zhuǎn)錄為cNDA
            2.3.3 PCR反應(yīng)
        2.4 新ORF的克隆測(cè)序
            2.4.1 膠回收
            2.4.2 克隆載體的構(gòu)建及測(cè)序
        2.5 新ORF的原核表達(dá)
            2.5.1 表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.5.2 表達(dá)重組菌的構(gòu)建及表達(dá)條件的篩選
            2.5.3 大量表達(dá)及純化
        2.6 兔抗重組目的蛋白和雞抗CVI988/Rispens高免血清的制備
            2.6.1 兔抗重組目的蛋白高免血清的制備
            2.6.2 雞抗CVI988/Rispens高免血清蛋白的制備
        2.7 間接免疫熒光
        2.8 Western-blot檢測(cè)新ORF在雞體中的免疫原性
        2.9 RT-PCR方法檢測(cè)ORF5.6/75.9和ORF97.3在雞體的轉(zhuǎn)錄情況
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 CVI988/Rispens復(fù)蘇結(jié)果及PFU測(cè)定
        3.2 RNA質(zhì)量檢測(cè)及RT-PCR結(jié)果
        3.3 新ORF基因克隆測(cè)序和表達(dá)載體構(gòu)建結(jié)果
        3.4 表達(dá)重組菌誘導(dǎo)條件篩選及目的蛋白的純化結(jié)果
        3.5 間接免疫熒光
        3.6 Western-blot結(jié)果
        3.7 ORF5.6/ORF75.9和ORF97.3基因在雞體中的轉(zhuǎn)錄情況檢測(cè)
    4 討論
        4.1 新ORF的初步篩選
        4.2 RT-PCR、間接免疫熒光和Western-blot方法
        4.3 三個(gè)新ORF的鑒定情況
        4.4 MDV-1具有免疫原性的蛋白
        4.5 MDV-1重復(fù)長(zhǎng)區(qū)
        4.6 新ORF生物信息學(xué)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介及攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MDV新疆株的分離和鑒定[J]. 羅朋,田建龍,熱合木江·達(dá)吾提,李金平.  新疆畜牧業(yè). 2009(01)
[2]雞眼型大腸桿菌與馬立克氏病混合感染的診治[J]. 田新玲.  新疆農(nóng)墾科技. 2007(04)
[3]雞馬立克氏病發(fā)生的新特點(diǎn)與防治措施[J]. 鄭祿生.  福建畜牧獸醫(yī). 2007(01)
[4]雞三種腫瘤病在廣西的流行病學(xué)研究[J]. 王桂軍,韋平,何秀苗,李康然,熊麗文,楊樂,磨美蘭,陶錦華.  中國(guó)家禽. 2002(10)
[5]禽白血病及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞增生病感染情況的調(diào)查[J]. 崔治中,朱承如,孫懷昌.  中國(guó)畜禽傳染病. 1987(01)

碩士論文
[1]馬立克氏病毒“814”疫苗株全基因組序列測(cè)定及分析[D]. 張鋒.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010



本文編號(hào)：3120822