偽狂犬病（Pseudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染引起的家畜和野生動物的烈性傳染病。從2011年底開始,我國多個省份免疫過Bartha-K61弱毒疫苗的豬場相繼爆發(fā)偽狂犬病,研究表明,此次疫情由PRV變異株引起。本研究建立了一種三重熒光定量PCR檢測方法,基于三種標記不同熒光信號的TaqMan探針,該方法可以鑒別檢測PRV經典株、變異株和Bartha-K61疫苗株。該方法對TJ株、SC株和Bartha-K61的檢測限分別為50、50和5拷貝。應用三重熒光定量PCR方法和病毒分離方法對234個樣品進行檢測,結果顯示,兩種方法的符合率分別為100%（經典株）、99.2%（變異株）和100%（Bartha-K61疫苗株）。以上結果表明,該方法具有良好的靈敏性和特異性,可以應用于PRV毒株的區(qū)別檢測。本研究還建立了一種交叉引物擴增—試紙條聯用法（CPA-strip）用于檢測PRV野毒。應用建立的檢測方法對PRV變異株進行檢測,最低檢測限為200個拷貝。特異性檢測結果顯示,該方法與一些常見的豬病病毒無交叉反應性。對293個臨床樣品進行檢... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：79 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３功能性ＩｎｃＲＮＡｓ與靶ｍＲＮＡ的位置關系??Ｆｉｇ．?１．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?ｌｏｎｇ?ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ?ＲＮＡ?（ＩｎｃＲＮＡｓ）?ａｎｄ?ｔａｒｇｅｔ??ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｄｉｎｇ?ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ?ＲＮＡ?（ｍＲＮＡ）．??

ｆａｃｔｏｒ?２）相互作用后，形成轉錄復合體，誘導ＩＳＧｓ的表達。研宄同樣??發(fā)現，ｈｎＲＮＰＵ?（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＵ）能夠結合并??穩(wěn)定ｌｎｃＲＮＡ＃３２，并幫助ｌｎｃＲＮＡ＃３２行使其功能（圖１．４）。??ＩＳＧｓ是宿主抵抗病毒的重要防線，但是其表達調控機制尚不完全清??楚。通過歸納和總結目前己知的研宄成果，我們確信ＩｎｃＲＮＡｓ是調控??ＩＳＧｓ表達的重要一環(huán)。ＩｎｃＲＮＡｓ調控ＩＳＧｓ作用機制的解析，同樣為揭??示病毒和宿主之間的相互作用提供基礎。??１２??

時區(qū)分檢測ＰＲＶ變異株和經典株，方案５可同時鑒別檢測三種ＰＲＶ毒??株，同時ＣＴ值最低，敏感性最高（表２．４）。因此，將方案５種的引??物和探針應用于后續(xù)試驗中（圖２．１和圖２．２）。??表２．４引物和探針的選擇。??Ｔａｂｌｅ?２．４?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｉｍｅｒｓ?ａｎｄ?ｐｒｏｂｅｓ．??Ｇｒｏｕｐ?１?Ｇｒｏｕｐ?２?Ｇｒｏｕｐ?３?Ｇｒｏｕｐ?４?Ｇｒｏｕｐ?５?Ｇｒｏｕｐ?６??ＦＡＭ?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?３３．８?３５．２??ＨＥＸ?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?３２．４?３３．５?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?３２．０?３５．３??Ｃｙ５?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?２２．１?２１．５?２１．３?２２．２?２２．８?２８．９??ＰＲＶ－Ｆ２?Ｃｙ５－ＰＲＶ－Ｂａｒ??Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１?，?＞?＜?■?■??／?，?、、＇、?ＰＲＶ－Ｒ２、、、、、??／?、、＇、、?＇＇??ＰＲＶ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｏｒ?／

【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬偽狂犬病病毒變異株的分離鑒定及其gE基因的分子特征[J]. 趙鴻遠,彭金美,安同慶,李琳,冷超糧,陳家锃,王倩,常丹,張秋月,蔡雪輝,童光志,田志軍.  中國預防獸醫(yī)學報. 2014(07)
[2]豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 彭金美,安同慶,趙鴻遠,劉益民,陳家锃,冷超糧,孫艷,常丹,田志軍,童光志.  中國預防獸醫(yī)學報. 2013(01)
[3]豬偽狂犬病研究進展[J]. 李春華,王英,蔣鳳英,胡建華.  動物醫(yī)學進展. 2008(03)
[4]檢測偽狂犬病病毒雙抗體夾心間接ELISA方法的建立與應用[J]. 汪招雄,何啟蓋,劉麗娜,劉正飛,黃紅亮,陳煥春.  中國預防獸醫(yī)學報. 2006(02)
[5]偽狂犬病流行現狀及我國應采取的防制措施[J]. 童光志,陳煥春.  中國獸醫(yī)學報. 1999(01)
[6]應用微量中和試驗進行豬偽狂犬病血清學調查[J]. 方六榮,陳煥春,何啟蓋,吳斌,金梅林,吳美洲.  中國畜禽傳染病. 1998(03)



本文編號：3119097