偽狂犬�。≒seudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染引起的家畜和野生動(dòng)物的烈性傳染病。從2011年底開始,我國多個(gè)省份免疫過Bartha-K61弱毒疫苗的豬場相繼爆發(fā)偽狂犬病,研究表明,此次疫情由PRV變異株引起。本研究建立了一種三重?zé)晒舛縋CR檢測方法,基于三種標(biāo)記不同熒光信號的TaqMan探針,該方法可以鑒別檢測PRV經(jīng)典株、變異株和Bartha-K61疫苗株。該方法對TJ株、SC株和Bartha-K61的檢測限分別為50、50和5拷貝。應(yīng)用三重?zé)晒舛縋CR方法和病毒分離方法對234個(gè)樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示,兩種方法的符合率分別為100%（經(jīng)典株）、99.2%（變異株）和100%（Bartha-K61疫苗株）。以上結(jié)果表明,該方法具有良好的靈敏性和特異性,可以應(yīng)用于PRV毒株的區(qū)別檢測。本研究還建立了一種交叉引物擴(kuò)增—試紙條聯(lián)用法（CPA-strip）用于檢測PRV野毒。應(yīng)用建立的檢測方法對PRV變異株進(jìn)行檢測,最低檢測限為200個(gè)拷貝。特異性檢測結(jié)果顯示,該方法與一些常見的豬病病毒無交叉反應(yīng)性。對293個(gè)臨床樣品進(jìn)行檢... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３功能性ＩｎｃＲＮＡｓ與靶ｍＲＮＡ的位置關(guān)系??Ｆｉｇ．?１．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?ｌｏｎｇ?ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ?ＲＮＡ?（ＩｎｃＲＮＡｓ）?ａｎｄ?ｔａｒｇｅｔ??ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｄｉｎｇ?ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ?ＲＮＡ?（ｍＲＮＡ）．??

ｆａｃｔｏｒ?２）相互作用后，形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，誘導(dǎo)ＩＳＧｓ的表達(dá)。研宄同樣??發(fā)現(xiàn)，ｈｎＲＮＰＵ?（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＵ）能夠結(jié)合并??穩(wěn)定ｌｎｃＲＮＡ＃３２，并幫助ｌｎｃＲＮＡ＃３２行使其功能（圖１．４）。??ＩＳＧｓ是宿主抵抗病毒的重要防線，但是其表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚不完全清??楚。通過歸納和總結(jié)目前己知的研宄成果，我們確信ＩｎｃＲＮＡｓ是調(diào)控??ＩＳＧｓ表達(dá)的重要一環(huán)。ＩｎｃＲＮＡｓ調(diào)控ＩＳＧｓ作用機(jī)制的解析，同樣為揭??示病毒和宿主之間的相互作用提供基礎(chǔ)。??１２??

時(shí)區(qū)分檢測ＰＲＶ變異株和經(jīng)典株，方案５可同時(shí)鑒別檢測三種ＰＲＶ毒??株，同時(shí)ＣＴ值最低，敏感性最高（表２．４）。因此，將方案５種的引??物和探針應(yīng)用于后續(xù)試驗(yàn)中（圖２．１和圖２．２）。??表２．４引物和探針的選擇。??Ｔａｂｌｅ?２．４?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｉｍｅｒｓ?ａｎｄ?ｐｒｏｂｅｓ．??Ｇｒｏｕｐ?１?Ｇｒｏｕｐ?２?Ｇｒｏｕｐ?３?Ｇｒｏｕｐ?４?Ｇｒｏｕｐ?５?Ｇｒｏｕｐ?６??ＦＡＭ?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?３３．８?３５．２??ＨＥＸ?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?３２．４?３３．５?Ｎｏｎｅ?Ｎｏｎｅ?３２．０?３５．３??Ｃｙ５?（ＣＴ?ｖａｌｕｅ）?２２．１?２１．５?２１．３?２２．２?２２．８?２８．９??ＰＲＶ－Ｆ２?Ｃｙ５－ＰＲＶ－Ｂａｒ??Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１?，?＞?＜?■?■??／?，?、、＇、?ＰＲＶ－Ｒ２、、、、、??／?、、＇、、?＇＇??ＰＲＶ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｏｒ?／

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬偽狂犬病病毒變異株的分離鑒定及其gE基因的分子特征[J]. 趙鴻遠(yuǎn),彭金美,安同慶,李琳,冷超糧,陳家锃,王倩,常丹,張秋月,蔡雪輝,童光志,田志軍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(07)
[2]豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 彭金美,安同慶,趙鴻遠(yuǎn),劉益民,陳家锃,冷超糧,孫艷,常丹,田志軍,童光志.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(01)
[3]豬偽狂犬病研究進(jìn)展[J]. 李春華,王英,蔣鳳英,胡建華.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(03)
[4]檢測偽狂犬病病毒雙抗體夾心間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[J]. 汪招雄,何啟蓋,劉麗娜,劉正飛,黃紅亮,陳煥春.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(02)
[5]偽狂犬病流行現(xiàn)狀及我國應(yīng)采取的防制措施[J]. 童光志,陳煥春.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1999(01)
[6]應(yīng)用微量中和試驗(yàn)進(jìn)行豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[J]. 方六榮,陳煥春,何啟蓋,吳斌,金梅林,吳美洲.  中國畜禽傳染病. 1998(03)



本文編號：3119097