為研發(fā)非洲豬瘟病毒（ASFV）的免疫學診斷試劑,利用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達重組ASFV P30蛋白,制備并鑒定P30蛋白單克隆抗體,建立檢測ASFV的膠體金免疫層析法（GICA）。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pET28a-P30,實現(xiàn)了重組P30蛋白的可溶性表達,且該重組蛋白與ASFV陽性血清可發(fā)生特異性反應(yīng);制備了10株穩(wěn)定分泌P30蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株,腹水ELISA效價均高于1∶40 000,與ASFV具有良好的反應(yīng)性,且不與其他常見豬源病毒反應(yīng);利用2株單克隆抗體建立膠體金免疫層析法,可用于ASFV的檢測。 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)科學. 2020,49(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pET28a-P30雙酶切鑒定結(jié)果

SDS-PAGE鑒定結(jié)果(圖2)表明,菌種在IPTG誘導后可表達出重組P30蛋白,且表達的重組蛋白主要存在于上清中,大小約30 ku,與預期結(jié)果一致。2.3 重組P30蛋白的純化與Western blot鑒定

采用Ni2+親和層析法純化上清中的可溶性重組P30蛋白。SDS-PAGE鑒定及光譜掃描結(jié)果表明,純化后目的蛋白純度約為83%(圖3A)。Western blot結(jié)果顯示,重組P30蛋白與ASFV陽性血清反應(yīng)可見特異性的陽性反應(yīng)條帶(圖3B)。表明重組P30蛋白具有良好的反應(yīng)性。2.4 P30蛋白免疫小鼠血清ELISA效價測定

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3118317