非洲豬瘟病毒P30蛋白單克隆抗體的制備與應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2021-04-04 19:07
為研發(fā)非洲豬瘟病毒（ASFV）的免疫學(xué)診斷試劑,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組ASFV P30蛋白,制備并鑒定P30蛋白單克隆抗體,建立檢測(cè)ASFV的膠體金免疫層析法（GICA）。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-P30,實(shí)現(xiàn)了重組P30蛋白的可溶性表達(dá),且該重組蛋白與ASFV陽(yáng)性血清可發(fā)生特異性反應(yīng);制備了10株穩(wěn)定分泌P30蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,腹水ELISA效價(jià)均高于1∶40 000,與ASFV具有良好的反應(yīng)性,且不與其他常見豬源病毒反應(yīng);利用2株單克隆抗體建立膠體金免疫層析法,可用于ASFV的檢測(cè)。
【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(10)北大核心
【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)
【部分圖文】：
pET28a-P30雙酶切鑒定結(jié)果
SDS-PAGE鑒定結(jié)果(圖2)表明,菌種在IPTG誘導(dǎo)后可表達(dá)出重組P30蛋白,且表達(dá)的重組蛋白主要存在于上清中,大小約30 ku,與預(yù)期結(jié)果一致。2.3 重組P30蛋白的純化與Western blot鑒定
采用Ni2+親和層析法純化上清中的可溶性重組P30蛋白。SDS-PAGE鑒定及光譜掃描結(jié)果表明,純化后目的蛋白純度約為83%(圖3A)。Western blot結(jié)果顯示,重組P30蛋白與ASFV陽(yáng)性血清反應(yīng)可見特異性的陽(yáng)性反應(yīng)條帶(圖3B)。表明重組P30蛋白具有良好的反應(yīng)性。2.4 P30蛋白免疫小鼠血清ELISA效價(jià)測(cè)定
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非洲豬瘟病毒p30蛋白的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[J]. 黃劍,徐晶晶,程雪飛,李國(guó)新,高飛,童光志. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020(05)
[2]基于金納米顆粒標(biāo)記非洲豬瘟病毒p30蛋白免疫層析檢測(cè)方法的建立[J]. 孫燕燕,趙亞茹,李昕,楊吉飛,牛慶麗,林密,王兆貴,劉猛,關(guān)貴全,殷宏,蔣韜,劉志杰. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020(08)
[3]非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 南文龍,李林,鞏明霞,陸游,吳曉東,陳義平. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2020(01)
[4]非洲豬瘟病毒及診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 康亞男,張小波,劉濤,張倩,張英,朱秀同,趙玉龍,吳雅清,鄭朝朝,劉博. 中國(guó)豬業(yè). 2019(08)
[5]非洲豬瘟病毒無標(biāo)簽重組K205R抗原制備與應(yīng)用[J]. 肖景景,盧會(huì)鵬,李洋洋,周曉慧,劉曉明,胡威,張曉凱,徐保娟,崔曉霞,張?chǎng)斡?張泉,夏曉莉,孫懷昌. 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2019(03)
[6]非洲豬瘟病毒沈陽(yáng)分離株p30基因的克隆及其親水區(qū)的原核表達(dá)[J]. 王永志,安鼎杰,李小宇,李忠鵬,張靜遠(yuǎn),張守峰,扈榮良,趙玉民. 東北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[7]非洲豬瘟病毒p30基因的原核表達(dá)及間接ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[J]. 吳競(jìng),王西西,吳映彤,任肖,郭曉宇. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(12)
[8]非洲豬瘟病毒主要抗原p54-1的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備與鑒定[J]. 王彩霞,馮春燕,杜方原,劉丹丹,張永寧,林祥梅,吳紹強(qiáng). 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(10)
[9]非洲豬瘟病毒p30-54融合蛋白基因的構(gòu)建、表達(dá)及其多克隆抗體制備[J]. 李杰,張星星,郭晶,孟慶玲,喬軍,張國(guó)武,王曉婷,李妍,才學(xué)鵬. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(09)
[10]非洲豬瘟K205R蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備[J]. 杜方原,馮春燕,仇松寅,王彩霞,張永寧,林祥梅,吳紹強(qiáng). 中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2018(08)
博士論文
[1]基于非洲豬瘟病毒P54蛋白抗原表位的ELISA檢測(cè)方法建立及應(yīng)用[D]. 曹琛福.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
碩士論文
[1]非洲豬瘟病毒p30重組蛋白的表達(dá)及單克隆抗體制備[D]. 儲(chǔ)德文.揚(yáng)州大學(xué) 2013
本文編號(hào)：3118317
【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(10)北大核心
【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)
【部分圖文】：
pET28a-P30雙酶切鑒定結(jié)果
SDS-PAGE鑒定結(jié)果(圖2)表明,菌種在IPTG誘導(dǎo)后可表達(dá)出重組P30蛋白,且表達(dá)的重組蛋白主要存在于上清中,大小約30 ku,與預(yù)期結(jié)果一致。2.3 重組P30蛋白的純化與Western blot鑒定
采用Ni2+親和層析法純化上清中的可溶性重組P30蛋白。SDS-PAGE鑒定及光譜掃描結(jié)果表明,純化后目的蛋白純度約為83%(圖3A)。Western blot結(jié)果顯示,重組P30蛋白與ASFV陽(yáng)性血清反應(yīng)可見特異性的陽(yáng)性反應(yīng)條帶(圖3B)。表明重組P30蛋白具有良好的反應(yīng)性。2.4 P30蛋白免疫小鼠血清ELISA效價(jià)測(cè)定
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非洲豬瘟病毒p30蛋白的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[J]. 黃劍,徐晶晶,程雪飛,李國(guó)新,高飛,童光志. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020(05)
[2]基于金納米顆粒標(biāo)記非洲豬瘟病毒p30蛋白免疫層析檢測(cè)方法的建立[J]. 孫燕燕,趙亞茹,李昕,楊吉飛,牛慶麗,林密,王兆貴,劉猛,關(guān)貴全,殷宏,蔣韜,劉志杰. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020(08)
[3]非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 南文龍,李林,鞏明霞,陸游,吳曉東,陳義平. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2020(01)
[4]非洲豬瘟病毒及診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 康亞男,張小波,劉濤,張倩,張英,朱秀同,趙玉龍,吳雅清,鄭朝朝,劉博. 中國(guó)豬業(yè). 2019(08)
[5]非洲豬瘟病毒無標(biāo)簽重組K205R抗原制備與應(yīng)用[J]. 肖景景,盧會(huì)鵬,李洋洋,周曉慧,劉曉明,胡威,張曉凱,徐保娟,崔曉霞,張?chǎng)斡?張泉,夏曉莉,孫懷昌. 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2019(03)
[6]非洲豬瘟病毒沈陽(yáng)分離株p30基因的克隆及其親水區(qū)的原核表達(dá)[J]. 王永志,安鼎杰,李小宇,李忠鵬,張靜遠(yuǎn),張守峰,扈榮良,趙玉民. 東北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[7]非洲豬瘟病毒p30基因的原核表達(dá)及間接ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[J]. 吳競(jìng),王西西,吳映彤,任肖,郭曉宇. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(12)
[8]非洲豬瘟病毒主要抗原p54-1的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備與鑒定[J]. 王彩霞,馮春燕,杜方原,劉丹丹,張永寧,林祥梅,吳紹強(qiáng). 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(10)
[9]非洲豬瘟病毒p30-54融合蛋白基因的構(gòu)建、表達(dá)及其多克隆抗體制備[J]. 李杰,張星星,郭晶,孟慶玲,喬軍,張國(guó)武,王曉婷,李妍,才學(xué)鵬. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(09)
[10]非洲豬瘟K205R蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備[J]. 杜方原,馮春燕,仇松寅,王彩霞,張永寧,林祥梅,吳紹強(qiáng). 中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2018(08)
博士論文
[1]基于非洲豬瘟病毒P54蛋白抗原表位的ELISA檢測(cè)方法建立及應(yīng)用[D]. 曹琛福.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
碩士論文
[1]非洲豬瘟病毒p30重組蛋白的表達(dá)及單克隆抗體制備[D]. 儲(chǔ)德文.揚(yáng)州大學(xué) 2013
本文編號(hào)：3118317
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