發(fā)布時間：2021-04-04 05:18

　　無漿體是一種專性血液寄生的可經(jīng)硬蜱傳播的病原體,世界范圍內(nèi)分布廣泛。本研究旨在建立一種可以同時檢測牛無漿體和山羊無漿體的雙重PCR方法。通過對2種病原gltA基因和msp4基因位點引物的篩選,PCR反應(yīng)體系中引物劑量、酶劑量和PCR反應(yīng)條件中的退火溫度、循環(huán)次數(shù)的優(yōu)化,最終確定了一個引物組合和最適的PCR反應(yīng)體系和條件,并對其進行了重復(fù)性和特異性驗證。結(jié)果表明,本研究建立的雙重PCR方法有效,操作簡便、特異性、重復(fù)性良好,為獸醫(yī)工作者和科研人員提供了一種山羊無漿體和牛無漿體感染快速鑒別診斷和流行病學(xué)監(jiān)測工具。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

不同退火溫度的PCR擴增

單獨用山羊無漿體引物(acmsp4f4/acmsp4r4)擴增陽性山羊無漿體陽性樣品,瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示在約641 bp處出現(xiàn)條帶,大小與預(yù)期目的片段大小相符(圖2)。圖2 PCR擴增結(jié)果

圖1 PCR擴增結(jié)果同時采用牛無漿體引物abgltAf1/abgltAr1和山羊無漿體引物acmsp4f4/acmsp4r4兩套引物進行PCR擴增,結(jié)果顯示得到2條特異性條帶,其中一條特異性條帶約133 bp,另一條約641 bp,與預(yù)期目的片段大小相符(圖3)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]奶牛四種蜱蟲病的臨床癥狀、鑒別診斷及治療[J]. 孫忠濤.  現(xiàn)代畜牧科技. 2019(01)
[2]山羊無漿體16S rRNA、MSP4和GroEL（HSP60）基因的克隆測序及分析[J]. 周作勇,王芝英,胡世君,彭開政,聶奎.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2014(03)
[3]實時熒光PCR檢測牛邊緣無漿體方法的建立及應(yīng)用[J]. 王貴強,李樹清,張子群,陳志飛,由軒,王巧全,杜凱,姚寶安.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2007(08)

碩士論文
[1]羊呂氏泰勒蟲與嗜吞噬細胞無漿體雙重PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[D]. 閆亞群.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號：3117800