副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus Parasuis, HPs）引起豬的一種常見的細(xì)菌性疾病,該病在我國的流行越來越廣泛,給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失,快速準(zhǔn)確診斷和掌握流行病學(xué)規(guī)律對指導(dǎo)該病的防控非常重要。針對現(xiàn)有方法的不足,本研究建立了一種檢測HPs的PCR方法,并運(yùn)用該方法對四川地區(qū)HPs進(jìn)行了分子流行病學(xué)調(diào)查,掌握了近期四川地區(qū)HPs的流行與分布、部分基因的分子進(jìn)化特征,為四川地區(qū)開展該病的防控監(jiān)測、流行風(fēng)險(xiǎn)分析、HPs基因數(shù)據(jù)庫的建立及疫苗研制等奠定了基礎(chǔ)。1.副豬嗜血桿菌0MP P2基因PCR檢測方法的建立本研究參照Genbank公布的HPs外膜蛋白P2基因,選擇其保守區(qū)域設(shè)計(jì)針對所有血清型HPs的PCR通用檢測引物,通過對退火溫度、引物濃度等條件的摸索優(yōu)化,成功建立了PCR快速檢測方法,將標(biāo)準(zhǔn)菌株HS80 PCR產(chǎn)物序列進(jìn)行測定和比對,結(jié)果表明序列同源性達(dá)97%-99%,證明了該P(yáng)CR方法對靶序列克隆的準(zhǔn)確性。再以15個(gè)血清型的HPs標(biāo)準(zhǔn)菌株和鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、丹毒桿菌等7種參考菌株對該方法的特異性和重復(fù)性進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果顯示該方法特異性... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 病原概述
    2 流行病學(xué)及致病機(jī)理
        2.1 流行病學(xué)研究
        2.2 致病機(jī)理研究
    3 毒力因子研究
        3.1 莢膜、菌毛等
        3.2 外膜蛋白（OMP）
        3.3 自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
        3.4 脂多糖（LSP）和脂寡糖（LOS）
        3.5 其他潛在毒力因子
    4 副豬嗜血桿菌的診斷
        4.1 清學(xué)診斷
        4.2 病原學(xué)診斷
    5 副豬嗜血桿菌病的防治
    6 研究的目的與意義
第二章 副豬嗜血桿菌OMP P2基因PCR檢測方法的建立與應(yīng)用
    1 材料
        1.1 試驗(yàn)菌株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要設(shè)備
        1.4 培養(yǎng)基及溶液配置
    2 方法
        2.1 PCR引物的設(shè)計(jì)
        2.2 HPs標(biāo)準(zhǔn)株復(fù)蘇
        2.3 HPs純度檢測
        2.4 細(xì)菌DNA模板提取
        2.5 PCR反應(yīng)條件的確立及PCR擴(kuò)增
        2.6 PCR產(chǎn)物回收純化與測序鑒定
        2.7 PCR特異性試驗(yàn)
        2.8 PCR靈敏性試驗(yàn)
        2.9 PCR方法的應(yīng)用
    3 結(jié)果
        3.1 PCR反應(yīng)條件的確立
        3.2 重組質(zhì)粒的PCR鑒定與測序
        3.3 PCR的特異性測定
        3.4 PCR的靈敏性測定
        3.5 PCR方法的應(yīng)用
    4 分析與討論
第三章 2013年四川地區(qū)HPs的分子流行病學(xué)調(diào)查
    1 材料
        1.1 病料
        1.2 試驗(yàn)菌株
        1.3 主要試劑及儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 病料處理
        2.2 病料的PCR檢測
        2.3 HPs espp2基因引物的設(shè)計(jì)
        2.4 espp2基因的擴(kuò)增
        2.5 PCR產(chǎn)物的回收純化及克隆測序
        2.6 HPs espp2基因序列分析
    3 結(jié)果
        3.1 病料采集
        3.2 HPs分子流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果
        3.3 HPs espp2基因的擴(kuò)增結(jié)果
        3.4 重組質(zhì)粒的PCR鑒定結(jié)果
        3.5 espp2基因的測序結(jié)果
        3.6 espp2基因同源性分析
        3.7 espp2基因氨基酸序列同源性及差異位點(diǎn)比較分析
        3.8 espp2基因系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    4 討論與分析
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Establishment and Application of an Indirect ELISA for Detection on Antibody of Haemophilus parasuis[J]. ZHENG Nian-guang 1 ,LUO Man-ling 1,2 ,GAO Juan 1 ,HE Ling 2 ,XIA Fang 2 ,TAN Shi-yong 3 ,CHEN Rui-ai 1. South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China; 2. Guangdong Dahuanong Animal Health Products CO. LTD,Yunfu 527400,China; 3. Guangdong Hu’nongwenshi Animal Husbandry CO. LTD,Yunfu 527400,China.  Animal Husbandry and Feed Science. 2012(02)
[2]副豬嗜血桿菌OMP P2基因PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 李鵬,李軍星,李玉峰,張國龍,宋艷華,王先煒,姜平.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(10)
[3]副豬嗜血桿菌抗體間接ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 馮小明,儲岳峰,賀英,高鵬程,趙萍,郭晗,樊祜卿,逯忠新.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2009(07)
[4]副豬嗜血桿菌病流行病學(xué)及致病因子的研究進(jìn)展[J]. 薛國聰,任濤.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(05)
[5]副豬嗜血桿菌血清5型間接血凝試驗(yàn)和間接ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 石碧,崔耀文,賈凡,金卉,萬云,蔡旭旺,方剛,陳煥春,周銳.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2007(11)
[6]我國部分地區(qū)副豬嗜血桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 尹秀鳳,王艷,姜平.  畜牧與獸醫(yī). 2007(06)
[7]副豬嗜血桿菌PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 尹秀鳳,王艷,姜平,李玉峰,蔣文明.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(02)
[8]副豬嗜血桿菌抗體間接血凝檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 魏子貢,蔡旭旺,金梅林,胡軍勇,葛君,陳煥春.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2006(09)
[9]副豬嗜血桿菌分離鑒定與PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 林雪玲,黃耿森,冼瓊珍,黃良宗,顧萬軍.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(03)
[10]副豬嗜血桿菌間接ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 王艷,夏萬田,柏坤桃,尹秀鳳,姜平.  畜牧與獸醫(yī). 2006(03)

碩士論文
[1]間接ELISA檢測HPS抗體方法的改進(jìn)與四川部分地區(qū)HPS的血清學(xué)調(diào)查[D]. 張亞成.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]HPS自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的免疫原性及其與宿主細(xì)胞相互作用研究[D]. 張玉娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]副豬嗜血桿菌的病原學(xué)檢測[D]. 王磊.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3116814