銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種重要的條件性致病菌,能感染多種動物,引發(fā)乳房炎、肺炎及敗血癥等多種疾病,該病原菌也是一種重要的醫(yī)源性致病菌,常引起人的肺部感染。近年來,銅綠假單胞菌對抗生素的耐藥性日趨嚴(yán)重,且該病原菌可形成生物被膜,給臨床治療造成了巨大的困難,已成為威脅全球公共衛(wèi)生安全的重大問題,因此研發(fā)針對銅綠假單胞菌的新型抗菌藥物已迫在眉睫�？咕模ˋntimicrobial peptides,AMPs）是天然免疫系統(tǒng)中一類多肽,具有抗菌譜廣、殺菌快速、耐藥性低等諸多優(yōu)點(diǎn),在對抗多重耐藥菌引起的嚴(yán)重感染中具有廣闊的應(yīng)用前景。Cathelicidins是一類存在于脊椎動物體內(nèi)的天然抗菌肽,具有多種生物學(xué)功能,是當(dāng)前抗菌新藥的研發(fā)熱點(diǎn)。本研究基于cathelicidins的種屬來源和結(jié)構(gòu)特征,選取人源LL-37、牛源BMAP-27、牛源BMAP-34以及鼠源mCRAMP 4種哺乳動物源α-螺旋型的cathelicidins為研究對象,化學(xué)合成多肽,比較和分析了體外的抗菌活性、抗生物被膜形成能力及免疫調(diào)節(jié)能力;以小鼠肺部感染模型評估了cathelicid... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

哺乳動物源cathelicidins對大腸桿菌的膜透化率

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章哺乳動物源cathelicidins的體外生物學(xué)活性研究20(a)哺乳動物源cathelicidins在4μM濃度下作用于大腸桿菌的透射電鏡圖片；(b)哺乳動物源cathelicidins在4μM濃度下作用于銅綠假單胞菌的透射電鏡圖片。注：箭頭位置表示膜損傷的位置。(a)theTEMimagesofE.coliaftertreatedbymammaliancathelicidinsat4μM;(b)theTEMimagesofP.aeruginosaaftertreatedbymammaliancathelicidinsat4μM.Notes:thearrowindicatesthesitesofmembranedamage.2.3.7Cathelicidins抗銅綠假單胞菌生物被膜形成的能力銅綠假單胞菌為了適應(yīng)環(huán)境，往往會形成生物被膜，這使得抗生素的殺菌效果顯著降低。本實(shí)驗測定了抗菌肽LL-37、BMAP-27、BMAP-34和mCRAMP在2μM和4μM濃度水平下的抗生物被膜能力，用激光共聚焦顯微鏡拍攝3D圖片，結(jié)果如圖2-5所示。對照組在36h后能夠形成厚度約為100μm的生物被膜。利用生物信息學(xué)軟件分析被膜中的生物量，結(jié)果如圖2-6所示。通過生物被膜的厚度和被膜生物量可以看出，LL-37、BMAP-27及mCRAMP與對照組相比，能明顯的抑制生物被膜的形成。在2μM時，抑制生物被膜形成能力由強(qiáng)到弱依次為BMAP-27、mCRAMP和LL-37，在4μM時LL-37和BMAP-27抑制生物被膜形成能力稍高于mCRAMP；BMAP-34在2μM和4μM時產(chǎn)生生物被膜的厚度和生物量與對照組相比差異不顯著，但被膜中的死菌數(shù)量隨著濃度上升而增加。圖2-5哺乳動物源cathelicidins抗銅綠假單胞菌生物被膜形成的作用效果Fig.2-5TheinhibitioneffectsofmammaliancathelicidinsonP.aeruginosa-inducedbiofilmBMAP-27at2μMBMAP-27at4μMBMAP-34at2μMBMAP-34at4μMmCRAMPat2μMmCRAMPat4μMLL-37at2μMLL-37at4μMControl

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章哺乳動物源cathelicidins的體外生物學(xué)活性研究222.3.9Cathelicidins抗菌肽對人嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用嗜中性粒細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分，數(shù)量位列吞噬細(xì)胞之首。在趨化因子或其它誘導(dǎo)劑的作用下，血液中的中性粒細(xì)胞能穿過血管壁，遷移到炎癥局部發(fā)揮抗菌作用。本實(shí)驗在1μM濃度下，利用transwell試驗進(jìn)一步探究LL-37、BMAP-27、BMAP-34和mCRAMP對人嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用并將趨化到下室中的細(xì)胞用熒光顯微鏡拍攝成圖，結(jié)果如圖2-8所示。每組選取3個具有代表性的視野進(jìn)行拍攝和統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果如圖2-9所示：在不加入多肽時，下室中僅零星分散著少量細(xì)胞，這表明培養(yǎng)基中不含有具有趨化作用的物質(zhì)。而在培養(yǎng)液中加入5μM的fMLP后，視野中的細(xì)胞量能夠提升至50倍左右。在1μM時，LL-37和mCRAMP的趨化作用較強(qiáng)，細(xì)胞數(shù)量分別為fMLP組的58%和64%，BMAP-34次之，細(xì)胞數(shù)量為fMLP組的41%，而BMAP-27對人嗜中性粒細(xì)胞幾乎沒有趨化作用。圖2-8哺乳動物源cathelicidins對人嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用Fig.2-8Thechemotaxisofmammaliancathelicidinsonhumanneutrophils圖2-9哺乳動物源cathelicidins對嗜中性粒細(xì)胞趨化作用的定量分析Fig.2-9QuantitativeanalysisofneutrophilchemotaxisbymammaliancathelicidinsControlBMAP-27BMAP-34mCRAMPLL-37020406080n.s.*******Neutrophilchemotaxis(%)


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