銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種重要的條件性致病菌,能感染多種動物,引發(fā)乳房炎、肺炎及敗血癥等多種疾病,該病原菌也是一種重要的醫(yī)源性致病菌,常引起人的肺部感染。近年來,銅綠假單胞菌對抗生素的耐藥性日趨嚴重,且該病原菌可形成生物被膜,給臨床治療造成了巨大的困難,已成為威脅全球公共衛(wèi)生安全的重大問題,因此研發(fā)針對銅綠假單胞菌的新型抗菌藥物已迫在眉睫�？咕模ˋntimicrobial peptides,AMPs）是天然免疫系統(tǒng)中一類多肽,具有抗菌譜廣、殺菌快速、耐藥性低等諸多優(yōu)點,在對抗多重耐藥菌引起的嚴重感染中具有廣闊的應用前景。Cathelicidins是一類存在于脊椎動物體內(nèi)的天然抗菌肽,具有多種生物學功能,是當前抗菌新藥的研發(fā)熱點。本研究基于cathelicidins的種屬來源和結(jié)構(gòu)特征,選取人源LL-37、牛源BMAP-27、牛源BMAP-34以及鼠源mCRAMP 4種哺乳動物源α-螺旋型的cathelicidins為研究對象,化學合成多肽,比較和分析了體外的抗菌活性、抗生物被膜形成能力及免疫調(diào)節(jié)能力;以小鼠肺部感染模型評估了cathelicid... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

哺乳動物源cathelicidins對大腸桿菌的膜透化率

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文第二章哺乳動物源cathelicidins的體外生物學活性研究20(a)哺乳動物源cathelicidins在4μM濃度下作用于大腸桿菌的透射電鏡圖片；(b)哺乳動物源cathelicidins在4μM濃度下作用于銅綠假單胞菌的透射電鏡圖片。注：箭頭位置表示膜損傷的位置。(a)theTEMimagesofE.coliaftertreatedbymammaliancathelicidinsat4μM;(b)theTEMimagesofP.aeruginosaaftertreatedbymammaliancathelicidinsat4μM.Notes:thearrowindicatesthesitesofmembranedamage.2.3.7Cathelicidins抗銅綠假單胞菌生物被膜形成的能力銅綠假單胞菌為了適應環(huán)境，往往會形成生物被膜，這使得抗生素的殺菌效果顯著降低。本實驗測定了抗菌肽LL-37、BMAP-27、BMAP-34和mCRAMP在2μM和4μM濃度水平下的抗生物被膜能力，用激光共聚焦顯微鏡拍攝3D圖片，結(jié)果如圖2-5所示。對照組在36h后能夠形成厚度約為100μm的生物被膜。利用生物信息學軟件分析被膜中的生物量，結(jié)果如圖2-6所示。通過生物被膜的厚度和被膜生物量可以看出，LL-37、BMAP-27及mCRAMP與對照組相比，能明顯的抑制生物被膜的形成。在2μM時，抑制生物被膜形成能力由強到弱依次為BMAP-27、mCRAMP和LL-37，在4μM時LL-37和BMAP-27抑制生物被膜形成能力稍高于mCRAMP；BMAP-34在2μM和4μM時產(chǎn)生生物被膜的厚度和生物量與對照組相比差異不顯著，但被膜中的死菌數(shù)量隨著濃度上升而增加。圖2-5哺乳動物源cathelicidins抗銅綠假單胞菌生物被膜形成的作用效果Fig.2-5TheinhibitioneffectsofmammaliancathelicidinsonP.aeruginosa-inducedbiofilmBMAP-27at2μMBMAP-27at4μMBMAP-34at2μMBMAP-34at4μMmCRAMPat2μMmCRAMPat4μMLL-37at2μMLL-37at4μMControl

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文第二章哺乳動物源cathelicidins的體外生物學活性研究222.3.9Cathelicidins抗菌肽對人嗜中性粒細胞的趨化作用嗜中性粒細胞是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分，數(shù)量位列吞噬細胞之首。在趨化因子或其它誘導劑的作用下，血液中的中性粒細胞能穿過血管壁，遷移到炎癥局部發(fā)揮抗菌作用。本實驗在1μM濃度下，利用transwell試驗進一步探究LL-37、BMAP-27、BMAP-34和mCRAMP對人嗜中性粒細胞的趨化作用并將趨化到下室中的細胞用熒光顯微鏡拍攝成圖，結(jié)果如圖2-8所示。每組選取3個具有代表性的視野進行拍攝和統(tǒng)計學分析，結(jié)果如圖2-9所示：在不加入多肽時，下室中僅零星分散著少量細胞，這表明培養(yǎng)基中不含有具有趨化作用的物質(zhì)。而在培養(yǎng)液中加入5μM的fMLP后，視野中的細胞量能夠提升至50倍左右。在1μM時，LL-37和mCRAMP的趨化作用較強，細胞數(shù)量分別為fMLP組的58%和64%，BMAP-34次之，細胞數(shù)量為fMLP組的41%，而BMAP-27對人嗜中性粒細胞幾乎沒有趨化作用。圖2-8哺乳動物源cathelicidins對人嗜中性粒細胞的趨化作用Fig.2-8Thechemotaxisofmammaliancathelicidinsonhumanneutrophils圖2-9哺乳動物源cathelicidins對嗜中性粒細胞趨化作用的定量分析Fig.2-9QuantitativeanalysisofneutrophilchemotaxisbymammaliancathelicidinsControlBMAP-27BMAP-34mCRAMPLL-37020406080n.s.*******Neutrophilchemotaxis(%)


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