大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）屬于我國(guó)獨(dú)有且瀕危珍稀的野生物種,受制于大面積棲息地碎片化和隔離小種群導(dǎo)致無法自然繁殖,大熊貓遷地保護(hù)工作因此尤為重要。大熊貓輪狀病毒（Giant Panda Rotavirus,GPRV）感染常引起幼獸的腹瀉,甚至死亡,是一種嚴(yán)重危害大熊貓遷地保護(hù)的疾病。輪狀病毒診斷方法多樣,各具優(yōu)缺點(diǎn),對(duì)于發(fā)生腹瀉性疾病的大熊貓而言,快速且準(zhǔn)確的區(qū)分是否輪狀病毒感染所致,能為臨床處置贏得寶貴的時(shí)間和提供方向性指導(dǎo)。近年來,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time Fuorescence Quantitative PCR,qPCR）在人類重大公共衛(wèi)生疫病的診斷中發(fā)揮了重大作用,被認(rèn)為是極其高效的診斷方法。本研究依據(jù)GenBank中登錄的GPRV VP4基因序列設(shè)計(jì)1對(duì)引物,通過對(duì)引物濃度、退火溫度和循環(huán)數(shù)的優(yōu)化,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立一種能快速準(zhǔn)確定量檢測(cè)樣品中的GPRV實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法,使本方法敏感度達(dá)1.0×10⁰拷貝/μL;同時(shí)通過對(duì)重組質(zhì)粒各稀釋度核酸樣品進(jìn)行常規(guī)RT-PCR檢測(cè),其敏感度可達(dá)1.0×1... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GPRV目的片斷PCR擴(kuò)增Fig.2-1ThetargetgeneofGPRVamplificationsbyPCR

實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR對(duì)不同濃度質(zhì)粒的檢測(cè)

以該試驗(yàn)優(yōu)化的條件進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR反應(yīng)并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)陽性模板的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)為實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 反應(yīng)過程中出現(xiàn)熒光信號(hào)的初始循環(huán)數(shù)Cq（圖2-3）。標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線方程為：y=-3.142x+52.254。結(jié)果顯示實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR在6.4×1013拷貝/μL~6.4×109拷貝/μL范圍內(nèi)，r2=0.999，具有良好的線性關(guān)系。圖 2-3 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-3 The standard curve


本文編號(hào)：3114518