胚胎在妊娠過程中作為“同種半異體”而不被母體所排斥,主要是通過調(diào)控母體與胎兒界面的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）的時相性表達(dá)來實現(xiàn)的。牛的MHC稱為牛白細(xì)胞抗原（BoLA）。BoLA-I類分子分為典型性和非典型性兩類分子。其中BoLA-A屬于典型的BoLA-I類分子,能夠呈遞抗原給相應(yīng)的T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；MIC1屬于非典型的BoLA-I類分子,能激活NK細(xì)胞的活性。已有研究證明由胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的IFN-τ是反芻動物的妊娠識別信號,能調(diào)控BoLA-A和MIC1時相性表達(dá),從而有助于胚胎的識別和妊娠的建立；雌二醇和/或孕酮能刺激胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞差異表達(dá)IFN-τ。孕酮和雌二醇對BoLA-A和MIC1的調(diào)控作用有待研究。因此,研究孕酮和/或雌二醇及其聯(lián)合IFN-τ對BoLA-A和MIC1的干預(yù)作用,有助于從分子通路和功能研究等方面更進(jìn)一步揭示BoLA-I類分子調(diào)節(jié)妊娠免疫的分子機(jī)制。首先將雌二醇設(shè)定3個濃度梯度分別為12.5pg/mL、25pg/mL和50pg/mL,孕酮設(shè)定3個濃度梯度分別為2.5ng/mL、5ng/mL和10ng/mL,作用時間設(shè)定為3h、6h、12h和24h。不同... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
1 前言
    1.1 主要生殖激素與奶牛妊娠的關(guān)系
        1.1.1 孕酮與奶牛妊娠
        1.1.2 雌激素與奶牛妊娠
        1.1.3 雌二醇與孕酮對奶牛妊娠的相互作用
    1.2 IFN-τ調(diào)節(jié)反芻動物妊娠
        1.2.1 IFN-τ的基因及蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 IFN-τ的受體
        1.2.3 IFN-τ抑制ER基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)制
        1.2.4 IFN-τ和生殖激素受體的表達(dá)
        1.2.5 IFN-τ抗黃體溶解作用
        1.2.6 IFN-τ的免疫調(diào)節(jié)功能
        1.2.7 IFN-τ對奶牛妊娠的作用
    1.3 MHC與妊娠的關(guān)系
        1.3.1 MHC的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 MHC-I分子功能
        1.3.3 MHC-I分子的結(jié)構(gòu)
        1.3.4 典型的MHC-I類分子BoLA-A與妊娠
        1.3.5 非典型的MHC-I類分子MIC1與妊娠
    1.4 研究目的及意義
        1.4.1 研究思路及技術(shù)基礎(chǔ)
        1.4.2 研究目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的采集
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及試劑配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法
        2.2.2 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表達(dá)BoLA-A和MIC1的E2、P4調(diào)節(jié)濃度評定
        2.2.3 E2、P4和IFN-τ作用于子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞
        2.2.4 實時熒光定量PCR
        2.2.5 細(xì)胞蛋白的提取及MIC1和BoLA-A蛋白測定-Western Blot分析
        2.2.6 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定及擴(kuò)倍
        3.1.1 細(xì)胞原代培養(yǎng)與鑒定
        3.1.2 細(xì)胞擴(kuò)倍
    3.2 細(xì)胞總RNA提取及鑒定
    3.3 cDNA合成及MIC1和BoLA-A鑒定
    3.4 MIC1和BoLA-A表達(dá)量
        3.4.1 擴(kuò)增產(chǎn)物質(zhì)量
        3.4.2 擴(kuò)增特異性
        3.4.3 數(shù)據(jù)結(jié)果的分析處理
    3.5 MIC1和BoLA-A蛋白的表達(dá)情況
4 討論
    4.1 主要生殖激素對妊娠的調(diào)節(jié)作用
    4.2 E2、P4調(diào)節(jié)奶牛子宮上皮細(xì)胞MIC1和BoLA-A基因表達(dá)
    4.3 IFN-τ調(diào)節(jié)奶牛子宮上皮細(xì)胞MIC1和BoLA-A基因表達(dá)
    4.4 IFN-τ與E2、P4聯(lián)合調(diào)節(jié)奶牛子宮上皮細(xì)胞MIC1和BoLA-A基因表達(dá)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生殖激素在奶牛繁殖中的應(yīng)用[J]. 劉書印.  當(dāng)代畜牧. 2008(10)
[2]沼澤型水牛發(fā)情周期生殖激素變化的研究[J]. 劉瑞鑫,蔣如明,韋英明.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2008(04)

碩士論文
[1]IFN-τ調(diào)控奶牛子宮上皮細(xì)胞表達(dá)MICB及BoLA-A的研究[D]. 吳岳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3111712