鴨疫里默氏桿菌病是鴨、鵝和多種其它禽類的一種接觸傳染性疾病,該病的發(fā)病率和死亡率較高,已成為目前危害世界各國養(yǎng)鴨業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病之一。目前,國內(nèi)鴨疫里默氏桿菌病流行的血清型以1型鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer, RA）出現(xiàn)頻率最高,本研究在測定血清1型RA全基因組序列基礎(chǔ)上,通過生物信息學(xué)分析獲得RA小熱休克蛋白基因hspl5,采用pET-32a（+）原核表達(dá)載體對該基因進(jìn)行表達(dá)和鑒定,并制備HSP15重組蛋白多克隆抗體,為該病的進(jìn)一步深入研究奠定基礎(chǔ)。首先,通過對血清1型RA全基因組序列進(jìn)行初步分析,確定RA hsp15基因完整開放閱讀框；其次,通過HSP15蛋白序列搜索比對、理化特性、亞細(xì)胞定位、跨膜區(qū)、疏水性、抗原性進(jìn)行分析。結(jié)果表明：RA hsp15基因大小為435 bp,密碼子有效數(shù)（effective number of codons, Nc）為43.806,RA hsp15基因含有一個連續(xù)的2個稀有密碼子串；編碼蛋白由144個氨基酸組成,該蛋白分子質(zhì)量為16.77 kDa,理論等電點p1為7.15,HSP15蛋白無信號肽,無跨膜區(qū)：疏水... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
一、引言
    1 鴨疫里默氏桿菌病概述
        1.1 病原學(xué)
        1.2 流行病學(xué)
        1.3 臨床癥狀和病理變化
        1.4 診斷
    2 鴨疫里默氏桿菌的分子生物學(xué)研究
    3 HSP15的研究進(jìn)展
    4 選題的目的和意義
二、實驗研究
    1 材料
        1.1 菌株和載體
        1.2 實驗動物
        1.3 主要藥品及試劑的配制
            1.3.1 T克隆及亞克隆相關(guān)溶液
            1.3.2 蛋白表達(dá)及純化主要試劑
            1.3.3 多克隆抗體制備主要試劑
            1.3.4 Western blotting試劑
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 方法
        2.1 RAHSP15基因生物信息學(xué)分析方法
            2.1.1 RAhsp15基因分子特性分析
            2.1.2 RAHSP15蛋白質(zhì)的分子特性分析
        2.2 RAHSP15基因的原核表達(dá)、純化及其抗體制備
            2.2.1 RA基因組DNA的提取
            2.2.2 RAhsp15基因片段的獲取
            2.2.3 目的片段的回收及未端加A
            2.2.4 hsp15基因的T克隆
            2.2.5 RA hsp15基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
            2.2.6 hsp15基因的原核表達(dá)和表達(dá)蛋白的鑒定、純化
            2.2.7 兔抗重組表達(dá)蛋白高免血清的制備與純化
    3 結(jié)果
        3.1 RAHSP15基因生物信息學(xué)分析結(jié)果
        3.2 RAHSP15蛋白的生物信息學(xué)分析結(jié)果
            3.2.1 蛋白質(zhì)組成及理化特性分析
            3.2.2 氨基酸序列比對
            3.2.3 信號肽切割位點預(yù)測
            3.2.4 跨膜區(qū)預(yù)測
            3.2.5 抗原性分析
            3.2.6 功能位點預(yù)測
            3.2.7 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.2.8 三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.2.9 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位分析
        3.3 RAHSP15基因的原核表達(dá)、純化及其抗體制備實驗結(jié)果
            3.3.1 目的基因的擴(kuò)增及T克隆鑒定
            3.3.2 重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
            3.3.3 重組蛋白在大腸桿菌的表達(dá)及分布
            3.3.4 重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
            3.3.5 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定及純化
            3.3.6 多克隆抗體效價測定
    4 討論
        4.1 RAHSP15基因生物信息學(xué)分析
        4.2 RAHSP15基因的原核表達(dá)、純化及其抗體制備
三、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3102804