豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）是迄今發(fā)現(xiàn)的一種最小的動物病毒,具有致病性,可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）。其主要的臨床表現(xiàn)為：呼吸道癥狀、貧血、黃疸、生長遲緩和進(jìn)行性消瘦等。PCV2能引起機體的免疫抑制,易與多種細(xì)菌、病毒混合感染。1991年首次在加拿大南部發(fā)現(xiàn)PMWS,我國于2000年證實在豬群中存在PCV2的感染。目前該病已遍及世界多個國家和地區(qū),給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。14-3-3蛋白是一類能與磷酸化蛋白結(jié)合或分離,調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能活性的蛋白質(zhì)。其具有伴侶蛋白的性質(zhì),廣泛參與細(xì)胞周期的調(diào)控,細(xì)胞的增殖與分化,信號轉(zhuǎn)導(dǎo),DNA損傷修復(fù),腫瘤的形成等生理活動。14-3-3蛋白屬于一類高度保守的蛋白質(zhì)家族,在真核動物中具有高度保守性,按其蛋白結(jié)構(gòu)的亞基不同,分為7個亞型（a,γ,β,η,θ,σ和ζ）。其中14-3-3σ蛋白又稱為stratifin（SFN）,分子大小約為28kDa。研究表明,14-3-3σ可與細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物結(jié)合,調(diào)控病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制；還能與一些抑癌基因相互作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的檢查點,對細(xì)胞的增殖... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation）
1. 前言
    1.1 豬圓環(huán)病毒2型概述
    1.2 PCV2的基因結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)
    1.3 PCV2在宿主細(xì)胞中的復(fù)制增殖
    1.4 病毒感染對細(xì)胞周期的影響
    1.5 14-3-3蛋白簡介
        1.5.1 14-3-3蛋白家族
        1.5.2 14-3-3蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.5.3 14-3-3蛋白的功能
2. 研究目的與意義
3. 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 病毒、質(zhì)粒、細(xì)胞和菌株
        3.1.2 試劑和試劑盒
        3.1.3 培養(yǎng)基和試劑的配制
        3.1.4 實驗儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 PK-15細(xì)胞中SFN基因的克隆
        3.2.2 真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-SFN的構(gòu)建
        3.2.3 真核蛋白的表達(dá)和檢測
        3.2.4 真核蛋白表達(dá)后對PCV2增殖的影響
        3.2.5 細(xì)胞周期的檢測
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
4. 結(jié)果與分析
    4.1 PK-15細(xì)胞中SFN基因的擴增
    4.2 重組質(zhì)粒pcDNA3.1（+）-SFN的構(gòu)建與鑒定
    4.3 間接免疫熒光檢測重組真核蛋白在PK-15細(xì)胞中的表達(dá)
    4.4 Western Blot檢測SFN蛋白的表達(dá)變化
    4.5 Real-Time PCR檢測SFN對PCV2增殖的影響
    4.6 流式細(xì)胞檢測SFN對細(xì)胞周期的影響
    4.7 流式細(xì)胞檢測真核表達(dá)SFN后接種PCV2對細(xì)胞周期的影響
5. 討論
    5.1 選擇PK-15細(xì)胞作為PCV2的增殖細(xì)胞
    5.2 SFN在PK-15細(xì)胞中的真核表達(dá)
    5.3 SFN在PK-15細(xì)胞內(nèi)對PCV2增殖的影響
    5.4 SFN對PK-15細(xì)胞周期S期的影響
    5.5 PCV2對PK-15細(xì)胞周期的影響
6. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3098950