發(fā)布時(shí)間：2021-03-24 19:24

　　本研究以水牛卵泡顆粒細(xì)胞作為線粒體的來(lái)源細(xì)胞,初步探討水牛卵母細(xì)胞進(jìn)行線粒體移植（MIT）對(duì)其發(fā)育潛能的影響,以期提高水牛卵母細(xì)胞的質(zhì)量和胚胎的發(fā)育能力。首先,探討了水牛卵泡顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法及線粒體活性的檢測(cè)。結(jié)果顯示：從卵泡液中分離得到的顆粒細(xì)胞活率為60%左右；采用DMEM培養(yǎng)基,顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)狀態(tài)優(yōu)于TCM-199和DMEM/F12培養(yǎng)基,細(xì)胞培養(yǎng)24h后開始零星增殖,3-5d增殖速度達(dá)到高峰；分別對(duì)第1、3、5、7代顆粒細(xì)胞的核型、凋亡率及其線粒體活性分析發(fā)現(xiàn)：第1、3、5、7代顆粒細(xì)胞正常核型比率差異不顯著,均在85%以上；第1代顆粒細(xì)胞的凋亡率（7.67±0.23%）與第三代（7.62±0.36%）差異不顯著,但與第5代（8.26±0.19%）和第7代（9.35±0.47%）相比,顆粒細(xì)胞的凋亡率顯著上升（P<0.05）；而線粒體的活性會(huì)隨著顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)代數(shù)的增加呈下降趨勢(shì)。其次,研究了水牛卵母細(xì)胞質(zhì)量及發(fā)育潛能與線粒體DNA （mtDNA）拷貝數(shù)的關(guān)系。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR （QRT-PCR）技術(shù)對(duì)體外成熟不同級(jí)別卵母細(xì)胞的mtDNA拷貝數(shù)進(jìn)行... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文簡(jiǎn)寫一中文對(duì)照表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 線粒體生物學(xué)性狀
        1.1 線粒體的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布
        1.2 線粒體的功能
        1.3 線粒體遺傳特性
        1.4 線粒體與細(xì)胞凋亡
        1.5 線粒體與胚胎發(fā)育
    2 影響卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的因素
        2.1 年齡
        2.2 卵胞質(zhì)
        2.3 染色體異常
    3 提高卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的方法
        3.1 卵胞質(zhì)移植
        3.2 生發(fā)泡移植
        3.3 線粒體移植
第二部分 試驗(yàn)部分
    前言
    第一章 水牛卵泡顆粒細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)及篩選
        摘要
        1. 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 主要儀器及試劑
            1.3 方法
            1.4 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 水牛顆粒細(xì)胞的活率及原代培養(yǎng)
            2.2 水牛顆粒細(xì)胞培養(yǎng)基的篩選
            2.3 水牛顆粒細(xì)胞的增殖檢測(cè)
            2.4 水牛顆粒細(xì)胞的核型分析
            2.5 水牛顆粒細(xì)胞的凋亡檢測(cè)
            2.6 線粒體的提取及活性檢測(cè)
        3 討論
        4 結(jié)論
    第二章 水牛卵母細(xì)胞質(zhì)量及發(fā)育潛能與線粒體拷貝數(shù)的關(guān)系
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要儀器及試劑
            1.3 試驗(yàn)方法
            1.4 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
            2.2 不同質(zhì)量水牛卵母細(xì)胞的mtDNA拷貝數(shù)
            2.3 不同級(jí)別水牛卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎的發(fā)育
        3 討論
        4 結(jié)論
    第三章 顆粒細(xì)胞線粒體移植對(duì)水牛卵母細(xì)胞的影響
        摘要
        1. 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 主要儀器及試劑
            1.3 試驗(yàn)方法
            1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.5 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 線粒體移植后的追蹤觀察
            2.2 線粒體移植對(duì)水牛胚胎發(fā)育的影響
            2.3 線粒體移植對(duì)水牛胚胎線粒體膜電位的影響
        3 討論
        4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
圖片說(shuō)明
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬卵巢顆粒細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定[J]. 朱麗,郭成志,鄧思君,魯銀,魏強(qiáng),袁慧.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2011(04)
[2]哺乳動(dòng)物卵泡顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)研究概況[J]. 楊永梅,陳娟,陳洋,楊雨江,鞏俊銘,姜懷志.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2011(03)
[3]水牛卵丘顆粒細(xì)胞凋亡與卵母細(xì)胞體外發(fā)育潛能的研究[J]. 王曉麗,楊娟,陳玉,成俊萍,潘紅平,韋精衛(wèi),陸鳳花,石德順.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(09)
[4]綿羊卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中的線粒體分布變化[J]. 曲楊燕,劉云海,郭勇,李凱,趙雁偉,李曉燕,倪和民.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(08)
[5]卵母細(xì)胞線粒體移植對(duì)年老小鼠植入前胚胎線粒體膜電位的影響[J]. 劉延荷,劉凱,連方,張建偉,孫振高.  山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(01)
[6]卵丘細(xì)胞線粒體移植對(duì)年老小鼠早期胚胎發(fā)育的影響[J]. 劉鋒,楊華,盧克煥,丘映.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2007(10)
[7]人卵母細(xì)胞體外成熟前后線粒體分布的變化[J]. 劉姍,李媛,高選,楊慧軍,顏軍昊,陳子江.  解剖學(xué)報(bào). 2007(05)
[8]異體顆粒細(xì)胞線粒體移植對(duì)牛孤雌激活胚胎發(fā)育的影響[J]. 王曉磊,雷安民,竇忠英.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(03)
[9]自體顆粒細(xì)胞線粒體移植對(duì)胚胎發(fā)育質(zhì)量的影響[J]. 孔令紅,劉忠,李紅,朱亮,陳思梅,陳士嶺,邢福祺.  中華婦產(chǎn)科雜志. 2004(02)
[10]首例經(jīng)自體顆粒細(xì)胞線粒體移植的雙胞胎兒出生[J]. 孔令紅,劉忠,李紅,朱亮,陳士嶺,邢福祺.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2003(09)

博士論文
[1]體細(xì)胞核移植及線粒體命運(yùn)的研究[D]. 華松.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007

碩士論文
[1]顆粒細(xì)胞線粒體移植對(duì)牛孤雌胚胎發(fā)育的影響[D]. 王曉磊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3098259