目的研究制備動物源糞腸球菌Ebp菌毛亞單位蛋白多克隆抗體及其可能的免疫學(xué)作用。方法運用生物信息學(xué)軟件對糞腸球菌菌毛EbpA、EbpB和EbpC蛋白的抗原表位進行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)6個抗原表位,將其構(gòu)建重組質(zhì)粒,表達(dá)、純化,免疫新西蘭大白兔后獲得了6個菌毛亞單位多克隆抗體,再進行抗體特異性和生物膜阻斷分析。結(jié)果 6個菌毛亞單位重組蛋白與預(yù)測的分子量相符,均對新西蘭大白兔具有免疫原性,EbpA1、EbpA2、EbpA3、EbpB1、EbpC1和EbpC2亞單位蛋白多克隆抗體效價經(jīng)雙向免疫瓊脂擴散實驗檢測分別達(dá)到1∶16、1∶8、1∶32、1∶32、1∶64和1∶64。經(jīng)WB檢測和生物膜阻斷試驗,6個多克隆抗體均具有抗原特異性和野生菌株生物膜阻斷作用,而且以EbpA1、EbpC1和EbpA3的生物膜阻斷作用最強。結(jié)論糞腸球菌EbpA1、EbpC1和EbpA3亞單位蛋白可能為糞腸球菌免疫預(yù)防和治療奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國人獸共患病學(xué)報. 2020,36(07)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

基因片段PCR擴增結(jié)果

重組表達(dá)質(zhì)粒 pET-28a-EbpA1、pET-28a-EbpA2、pET-28a-EbpA3、pET-28a-EbpC1、pET-28a-EbpC2和pET-28a-EF1092A (EbpB)雙酶切結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相一致(圖2),即在相應(yīng)的質(zhì)粒和片段處分別出現(xiàn)了相應(yīng)的條帶,而且經(jīng)比對后序列正確。2.3 重組蛋白的表達(dá)及鑒定

優(yōu)化條件后,重組質(zhì)粒pET-28a-EbpA1、pET-28a-EbpA2、pET-28a-EbpA3、pET-28a-EbpC1、pET-28a-EbpC2和pET-28a-EbpB1的表達(dá)菌最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為:誘導(dǎo)溫度37 ℃、IPTG終濃度0.2 mmol/L、誘導(dǎo)時間6 h。重組蛋白EbpA1和EbpA2主要以包涵體形式表達(dá),重組蛋白EbpA3、EbpC1、EbpC2和EbpB1主要以可溶性形式表達(dá)。各重組蛋白大小分別為46.7、45.0、39.4、50.0、39.3、36.0 kD,與預(yù)期結(jié)果一致,其純化結(jié)果見圖3。2.4 多抗效價的測定

【參考文獻】：
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