乳腺上皮細(xì)胞是一種高度分化的體細(xì)胞，但其在體外培養(yǎng)條件下仍可保持合成和分泌乳汁的功能，因此可作為靶細(xì)胞被用于乳腺生物反應(yīng)器的制作，產(chǎn)生具有很高藥用價(jià)值和活性成分的外源蛋白質(zhì)產(chǎn)物，這對(duì)于建立乳腺生物反應(yīng)器、通過(guò)核移植獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物都具有重要的意義。因此建立一個(gè)有永生潛力乳腺上皮細(xì)胞系是非常重要的。相比于多種建立永生細(xì)胞系的方法，如過(guò)表達(dá)原癌基因、轉(zhuǎn)染SV40大T抗原等，使用端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因可有效降低細(xì)胞在永生化過(guò)程中發(fā)生生物學(xué)特征改變甚至發(fā)生癌變等的風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)使用奶山羊的乳腺組織進(jìn)行乳腺上皮細(xì)胞分離純化培養(yǎng)，向細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染含有hTERT基因的表達(dá)載體，并進(jìn)行細(xì)胞篩選，以期獲得永生化的山羊乳腺上皮細(xì)胞系，為后續(xù)的研究奠定基礎(chǔ)。獲得主要結(jié)果如下：1.使用組織塊培養(yǎng)法，在5d后組織塊遷出細(xì)胞，觀察細(xì)胞為多角形，形態(tài)一致，為典型乳腺上皮細(xì)胞的鋪路石狀，細(xì)胞界限清楚，連接緊密，分布密集，增殖旺盛，免疫組織化學(xué)鑒定表明乳腺上皮細(xì)胞表達(dá)角蛋白；通過(guò)體外誘導(dǎo)，山羊乳腺上皮細(xì)胞可以分泌β-酪蛋白。2.使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將外源基因pCI-neo-hTERT轉(zhuǎn)入第3代的奶山羊乳腺上皮細(xì)胞，經(jīng)500μg/... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

山羊乳腺上皮細(xì)胞角蛋白免疫熒光染色A:角蛋白染色；B：DAPI染色；C：合并圖D：白光圖

A BC D圖 2-2 山羊乳腺上皮細(xì)胞角蛋白免疫熒光染色A: 角蛋白染色； B：DAPI 染色；C：合并圖 D：白光圖Fig.2-2 cytokeratin immunofluorescence of GMECsA: cytokeratin staining; B: DAPI staining; C: Merge Figure D: White Figure

R 產(chǎn)物回收送測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果在 GeneBank 上和山羊 的全基因序列進(jìn)行比對(duì)，GeneBank 上登錄號(hào)為 AF40909圖 2-4 RT-PCR 檢測(cè) GMECs 的 β-酪蛋白的表達(dá)Fig.2-4 Detection of beta-casein expression in GMECs by RT-圖 2-5 GMECs 的 β-酪蛋白的 RT-PCR 產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]牛乳腺上皮細(xì)胞永生化及其多能性的研究[D]. 李吉霞.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010

碩士論文
[1]奶牛乳腺上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及應(yīng)用[D]. 王治國(guó).中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007
[2]山羊乳腺上皮細(xì)胞的分離與體外培養(yǎng)[D]. 任芳麗.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2002
[3]山羊乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)特性的研究[D]. 陳剛.揚(yáng)州大學(xué) 2002



本文編號(hào)：3096520