蛋雞（Gallus gallus domesticus）輸卵管炎與輸卵管囊腫是危害養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病,引起該病的病原較多,其中鴨源雞桿菌（Gallibacterium anatis）是比較常見的病原。目前,乳酸菌作為食品級的表達載體在研制活載體疫苗中被廣泛應用。本研究以干酪乳酸桿菌（Lactobacillus casei, CECT5276）作為遞呈抗原的活菌載體,構建能夠穩(wěn)定表達鴨源雞桿菌菌毛FlfA蛋白的重組干酪乳酸桿菌,并初步評價其免疫效果。首先將鴨源雞桿菌flfA基因克隆至穿梭表達質粒pMG36e,然后電轉化干酪乳酸桿菌,對重組菌中FlfA蛋白表達和重組菌生長狀況、穩(wěn)定性、存留性能及耐受力等進行檢測分析,初步評價重組菌的免疫效果。SDS-PAGE和Western blot分析表明,重組干酪乳酸桿菌成功表達分子量約為20.3 kD的融合蛋白,該蛋白能與兔抗鴨源雞桿菌陽性血清發(fā)生反應,具有反應原性;生長狀況及穩(wěn)定性等分析顯示,目的基因的插入對干酪乳酸桿菌生長無影響,可在宿主菌中穩(wěn)定遺傳;在模擬腸液、胃液及高鹽環(huán)境中均有較好的耐受力;免疫后第14、28、42 d免疫血清及腸道黏液的特異... 

【文章來源】：農業(yè)生物技術學報. 2020,28(09)北大核心CSCD

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重組質粒pMG36e-flfA的PCR鑒定(A)和酶切鑒定(B)

圖1 重組質粒pMG36e-flfA的PCR鑒定(A)和酶切鑒定(B)重組菌在含紅霉素的MRS培養(yǎng)基中連續(xù)傳20代，隔代抽提細菌基因組DNA，用特異性引物進行PCR鑒定。結果顯示，各代次重組菌中均能擴增出長度約549 bp的目的條帶(圖5)，提示flfA基因能在干酪乳酸桿菌中穩(wěn)定遺傳。

重組桿菌在不同鹽濃度的培養(yǎng)基中靜置培養(yǎng)5 h，涂板計數(shù)，對滲透壓耐受能力進行分析(圖8)。與對照組比較，不同濃度NaCl處理的重組菌計數(shù)有所變化，其中在7%及9%NaCl培養(yǎng)基中重組菌數(shù)量明顯下降(P<0.05)，但在5%NaCl環(huán)境中耐受力較好。2.9 免疫雛雞血清中特異性IgG抗體檢測

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3096038