為篩選馬鼻肺炎（equine rhinopneumonitis,ER）基因缺失減毒活疫苗的候選毒株,本研究參考GenBank中EHV-1（登錄號:KF644579.1）目的基因序列設(shè)計同源臂引物,以本地區(qū)流行株XJ2015株DNA為模板PCR擴增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表達盒（CMV+EGFP+polyA）為標記基因,酶切后依次連接至載體pUC-19,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pUC-gEH1H2-EGFP。將XJ2015基因組與質(zhì)粒pUC-gEH1H2-EGFP共轉(zhuǎn)染至RK-13細胞進行同源重組,以EGFP為標記進行g(shù)E基因缺失毒株的篩選及純化,并測定重組毒株效價。結(jié)果顯示:經(jīng)5輪熒光噬斑純化、PCR及測序鑒定,成功獲取一株攜帶EGFP基因的重組毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重組毒株效價(10^7.1TCID₅₀/0.1 mL)較原毒株(10^8.8TCID₅₀/0.1 mL)下降約10^1.7TCID₅₀/0.1 mL。采用同源重組技術(shù)成功... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒、毒株和細胞
        1.1.2 主要試劑
    1.2 引物設(shè)計與合成
    1.3 轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建
    1.4 細胞轉(zhuǎn)染及觀察
    1.5 gE基因缺失病毒的構(gòu)建
        1.5.1 EHV-1全基因組提取
        1.5.2 gE基因缺失毒株的構(gòu)建
        1.5.3 重組病毒的純化
    1.6 重組病毒半數(shù)組織感染量測定
2 結(jié) 果
    2.1 目的基因擴增及重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果
        2.1.1 gEH1、gEH2基因PCR擴增結(jié)果
        2.1.2 轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pUC-gEH1H2-EGFP酶切鑒定結(jié)果
    2.2 轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pUC-gEH1H2-EGFP EGFP表達盒鑒定結(jié)果
    2.3 含EGFP的gE基因缺失株的構(gòu)建、純化及鑒定
    2.4 重組毒株效價的測定
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]馬皰疹病毒1型XJ2015株全基因組測序及分析[J]. 胡月,劉建華,鮑子磊,王世民,范斌,賈慶瑞,王雪竹,王思云,冉多良.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2018(11)
[2]馬皰疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失載體的構(gòu)建[J]. 范斌,陳卓,劉建華,鮑子磊,胡月,賈欽瑞,王雪竹,冉多良.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(10)
[3]新疆伊犁地區(qū)馬皰疹病毒1型ORF30基因序列分析[J]. 范斌,王燕,阿瑪古麗·朱馬漢,冉多良,劉建華,加爾肯.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(01)



本文編號：3095714