H5N6亞型禽流感是傳播性極強的人畜共患病。為了提高H5N6亞型禽流感病毒（AIV）核酸檢測結果的準確性,本研究根據(jù)其HA、NA基因的序列分別設計合成特異性引物,利用基因克隆和體外轉錄技術,分別制備出H5N6亞型AIV檢測用HA-cRNA、NA-cRNA核酸標準物質。利用熒光定量PCR檢測方法測定均勻性和穩(wěn)定性,繪制標準擴增曲線和協(xié)作標定,計算HA-cRNA、NA-cRNA的含量（拷貝）及不確定度。結果:H5N6亞型AIV核酸標準物質的組間和組內精密度無顯著差異（P>0.05）,均勻性好;穩(wěn)定性檢驗表明,保存在不同溫度時間內的標準物質含量無明顯變化;本研究制備的H5N6亞型AIV HA、NA基因核酸標準物質最終定值為（4.13±0.18）×10⁹ 拷貝數(shù)/μL和（1.77±0.15）×10¹⁰拷貝數(shù)/μL。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

H5N6亞型AIV HA基因、NA基因序列比對結果

用設計好的引物對H5N6亞型流感病毒的HA和NA基因全長片段PCR擴增。1%瓊脂糖凝膠電泳結果顯示,HA、NA基因片段大小約為1 704 bp、1 413 bp,與預期相符(圖2)。2.3 重組質粒PCR鑒定

重組質粒PCR結果

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]4株H5N6亞型禽流感病毒毒株的分離鑒定與致病性研究[J]. 周佩嬌,邢利,賈偉新,廖明.  畜牧獸醫(yī)學報. 2018(01)
[4]HCV核糖核酸國家二級標準物質的研制[J]. 蔣玲麗,王華梁,王雪亮,鮑蕓,肖艷群.  臨床檢驗雜志. 2016(01)

碩士論文
[1]H5N6亞型禽流感病毒HA-NA匹配性的初步探索[D]. 曾昭勇.華南農業(yè)大學 2016



本文編號：3090147