H5N6亞型禽流感是傳播性極強(qiáng)的人畜共患病。為了提高H5N6亞型禽流感病毒（AIV）核酸檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,本研究根據(jù)其HA、NA基因的序列分別設(shè)計(jì)合成特異性引物,利用基因克隆和體外轉(zhuǎn)錄技術(shù),分別制備出H5N6亞型AIV檢測(cè)用HA-cRNA、NA-cRNA核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。利用熒光定量PCR檢測(cè)方法測(cè)定均勻性和穩(wěn)定性,繪制標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線和協(xié)作標(biāo)定,計(jì)算HA-cRNA、NA-cRNA的含量（拷貝）及不確定度。結(jié)果:H5N6亞型AIV核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的組間和組內(nèi)精密度無(wú)顯著差異（P>0.05）,均勻性好;穩(wěn)定性檢驗(yàn)表明,保存在不同溫度時(shí)間內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量無(wú)明顯變化;本研究制備的H5N6亞型AIV HA、NA基因核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)最終定值為（4.13±0.18）×10⁹ 拷貝數(shù)/μL和（1.77±0.15）×10¹⁰拷貝數(shù)/μL。 

【文章來(lái)源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(12)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

H5N6亞型AIV HA基因、NA基因序列比對(duì)結(jié)果

用設(shè)計(jì)好的引物對(duì)H5N6亞型流感病毒的HA和NA基因全長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增。1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示,HA、NA基因片段大小約為1 704 bp、1 413 bp,與預(yù)期相符(圖2)。2.3 重組質(zhì)粒PCR鑒定

重組質(zhì)粒PCR結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽流感病毒H5亞型一種新分支（clade2.3.4.4）的流行概況[J]. 胡景凱,金宣講,李智賢,王瀟,戴怡雪,李曉,廖明,賈偉新.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(01)
[2]病毒性神經(jīng)壞死病病毒核酸檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備[J]. 段燕喻,陳茹,吳曉薇,朱道中,林志雄,田純見,劉志玲.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2018(02)
[3]4株H5N6亞型禽流感病毒毒株的分離鑒定與致病性研究[J]. 周佩嬌,邢利,賈偉新,廖明.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(01)
[4]HCV核糖核酸國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制[J]. 蔣玲麗,王華梁,王雪亮,鮑蕓,肖艷群.  臨床檢驗(yàn)雜志. 2016(01)

碩士論文
[1]H5N6亞型禽流感病毒HA-NA匹配性的初步探索[D]. 曾昭勇.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3090147