單核細(xì)胞增多性李斯特菌（listeria monocytogenes, LM）是重要的食源性胞內(nèi)致病菌，臨床主要引起腦膜炎，腦膜腦炎，圍產(chǎn)期母畜和胎兒感染。該病的發(fā)生主要是源于該菌能穿過(guò)動(dòng)物三大屏障：腸道屏障、血腦屏障、血胎屏障。LM可以跨越血腦屏障中主要組成結(jié)構(gòu)—腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接，表明LM表面存在著不同的配體，這些配體可以與內(nèi)皮細(xì)胞上受體相結(jié)合，進(jìn)而使其進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞內(nèi)的蛋白相互作用。為了篩選與LM表面蛋白相互作用的宿主內(nèi)皮細(xì)胞蛋白，本研究以人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（原代）、鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（傳代）為體外血腦屏障模型，通過(guò)LM侵染上述細(xì)胞建立cDNA文庫(kù)，為酵母雙雜交的篩選奠定基礎(chǔ)。1.李斯特菌的PCR檢測(cè)：根據(jù)已公布李斯特菌各菌種保守基因Iap和lmo0038的核苷酸序列，合成了能夠區(qū)分李斯特菌不同種的特異性引物，對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的菌種進(jìn)行PCR的驗(yàn)證，本試驗(yàn)中李斯特菌各菌株的PCR鑒定結(jié)果為：種1、種2、種3擴(kuò)增出1108bp特異性條帶,確定為塞氏李斯特菌，種5、干粉3、干粉4擴(kuò)增出720bp和403bp特異性條帶，確定單核細(xì)胞增多性李斯特菌。2.LM對(duì)人／鼠腦微血管內(nèi)皮... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

單增李斯特菌感染宿主細(xì)胞過(guò)程及涉及相關(guān)毒力因子Figure3-1TheListeriamonocytogenescellinfectioncycleandthevirulencefactorsinvolvedinthesuccessivesteps.

cDNA合成原理簡(jiǎn)要步驟Figure4-1：SchematicoutlineofcDNAsynthesis

循環(huán)數(shù) 步1 預(yù)30 循1 延1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。鉀平板篩選氏陽(yáng)性菌，染色后藍(lán)色小桿菌或球桿狀菌芽胞，無(wú)莢膜。菌體大小為寬 0.4~ 0.5μm形成易于辨認(rèn)溶血的、黑色、細(xì)小的菌落定，PCR 預(yù)擴(kuò)增片段大小與結(jié)果為：試驗(yàn)中種 2、種 3 擴(kuò)增序列大小為 1108bp,即為塞小為 720bp 和 403bp，即為單核細(xì)胞增生

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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