單核細胞增多性李斯特菌（listeria monocytogenes, LM）是重要的食源性胞內致病菌，臨床主要引起腦膜炎，腦膜腦炎，圍產期母畜和胎兒感染。該病的發(fā)生主要是源于該菌能穿過動物三大屏障：腸道屏障、血腦屏障、血胎屏障。LM可以跨越血腦屏障中主要組成結構—腦微血管內皮細胞間緊密連接，表明LM表面存在著不同的配體，這些配體可以與內皮細胞上受體相結合，進而使其進入宿主細胞內與細胞內的蛋白相互作用。為了篩選與LM表面蛋白相互作用的宿主內皮細胞蛋白，本研究以人腦微血管內皮細胞（原代）、鼠腦微血管內皮細胞（傳代）為體外血腦屏障模型，通過LM侵染上述細胞建立cDNA文庫，為酵母雙雜交的篩選奠定基礎。1.李斯特菌的PCR檢測：根據已公布李斯特菌各菌種保守基因Iap和lmo0038的核苷酸序列，合成了能夠區(qū)分李斯特菌不同種的特異性引物，對實驗室保存的菌種進行PCR的驗證，本試驗中李斯特菌各菌株的PCR鑒定結果為：種1、種2、種3擴增出1108bp特異性條帶,確定為塞氏李斯特菌，種5、干粉3、干粉4擴增出720bp和403bp特異性條帶，確定單核細胞增多性李斯特菌。2.LM對人／鼠腦微血管內皮... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

單增李斯特菌感染宿主細胞過程及涉及相關毒力因子Figure3-1TheListeriamonocytogenescellinfectioncycleandthevirulencefactorsinvolvedinthesuccessivesteps.

cDNA合成原理簡要步驟Figure4-1：SchematicoutlineofcDNAsynthesis

循環(huán)數 步1 預30 循1 延1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。鉀平板篩選氏陽性菌，染色后藍色小桿菌或球桿狀菌芽胞，無莢膜。菌體大小為寬 0.4~ 0.5μm形成易于辨認溶血的、黑色、細小的菌落定，PCR 預擴增片段大小與結果為：試驗中種 2、種 3 擴增序列大小為 1108bp,即為塞小為 720bp 和 403bp，即為單核細胞增生

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3089248