實驗旨在探究泛素蛋白酶體中羧基末端水解酶L3（UCH-L3）對牛骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖和分化的影響。使用已經(jīng)建立的牛骨骼肌衛(wèi)星細胞體外成肌分化模型,體外模仿骨骼肌的發(fā)育過程,設計并合成UCH-L3的si-RNA,轉染牛骨骼肌衛(wèi)星細胞,篩選出有顯著干擾效果的si-RNA。用EdU染色檢測干擾UCH-L3對細胞增殖的影響。用免疫熒光的方法檢測干擾UCH-L3表達后對肌管形成的影響,并采用Western blot技術檢測分化后分化標志基因MyHC表達水平的變化,綜合分析干擾UCH-L3對牛肌衛(wèi)星細胞成肌分化的影響。結果表明:干擾UCH-L3后肌衛(wèi)星細胞EdU染色陽性率與對照組無明顯差異;干擾UCH-L3后分化形成肌管的數(shù)量少于對照組,肌管融合指數(shù)顯著低于對照組,分化標志因子MyHC的蛋白水平顯著低于對照組。本研究結果表明,干擾UCH-L3的表達能夠抑制牛骨骼肌衛(wèi)星細胞的成肌分化過程。 

【文章來源】：中國畜牧雜志. 2020,56(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

牛骨骼肌衛(wèi)星細胞轉染Si-UCH-L3后q RT-PCR檢測UCH-L3 RNA表達水平

用si-UCH-L3-3轉染牛骨骼肌衛(wèi)星細胞，進一步利用Western blot技術檢測si-UCH-L3-3干擾效果。如圖3所示，相比較si-NC組，實驗組的UCH-L3在蛋白水平也顯著降低，說明si-UCH-L3-3可用于進行下一步實驗。圖2 牛骨骼肌衛(wèi)星細胞轉染Si-UCH-L3后q RT-PCR檢測UCH-L3 RNA表達水平

牛骨骼肌衛(wèi)星細胞轉染干擾后UCH-L3表達的Western blot檢測


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