發(fā)布時間：2021-03-08 16:07

　　精子尾部是由位于曲精細(xì)管上皮的精原干細(xì)胞經(jīng)歷有絲分裂、減數(shù)分裂后,在精子變態(tài)過程中形成。尾部是精子的代謝與運動器官,與精子的活動能力有密切關(guān)系,而精子的活動能力是完成受精的重要前提條件。當(dāng)精子的活力低下、尾部畸形或行動方向不規(guī)則都可能導(dǎo)致不育。研究精子尾部形成的分子機理對于探尋精子形成及精子結(jié)構(gòu)異常造成的精液品質(zhì)不良的成因具有重要意義。目前的研究還無法還原精子尾部的體外生成過程。本研究選擇在精子尾部起重要作用的基因Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr,通過克隆獲得完整CDS序列,對其序列特征、時空表達(dá)規(guī)律、表達(dá)產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位進(jìn)行分析研究,并探索基因的過表達(dá)對體外培養(yǎng)精原干細(xì)胞分化的影響,從而為深入研究精子尾部發(fā)生的分子機理及調(diào)控機制奠定基礎(chǔ)。全文結(jié)果如下：一、采用RT-PCR和RACE的方法克隆了豬Odf2、Odf3、Tektin4基因及Cabyr基因的3種剪接體cDNA序列；對所獲序列利用軟件分析編碼氨基酸的結(jié)構(gòu)、同源性比較及分子進(jìn)化樹的構(gòu)建。結(jié)果表明Odf2基因cDNA長3300bp,編碼蛋白長度為810個氨基酸,有連續(xù)的Coiled coil結(jié)構(gòu)；Odf3基因cDNA... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫
文獻(xiàn)綜述
    1 精子發(fā)生的過程及參與精子發(fā)生的基因
        1.1 精子的結(jié)構(gòu)
        1.2 精子發(fā)生的過程
        1.3 參與精子發(fā)生的基因
    2 參與精子尾部發(fā)生的相關(guān)基因研究進(jìn)展
        2.1 精子尾部的發(fā)生過程
        2.2 精子尾部主要結(jié)構(gòu)單元的功能及相關(guān)基因
        2.3 精子尾部結(jié)構(gòu)異常造成不育
    3 精原干細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)外誘導(dǎo)分化的研究進(jìn)展
        3.1 精原干細(xì)胞的來源
        3.2 精原干細(xì)胞體外的長期培養(yǎng)
        3.3 精原干細(xì)胞維持和分化的分子調(diào)控機制
        3.4 精原干細(xì)胞的移植
        3.5 精原干細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化
    4 本研究的目的與意義
    參考文獻(xiàn)
第一章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的克隆
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 睪丸組織RNA提取與cDNA的合成
        1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因cDNA序列的克隆
        1.5 RACE
        1.6 序列的生物信息學(xué)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 豬Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的克隆
        2.2 豬Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr序列及編碼蛋白的結(jié)構(gòu)分析
        2.3 豬Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr同源性比較和系統(tǒng)發(fā)育樹分析
            2.3.1 同源性分析
            2.3.2 序列的多重比較
            2.3.3 進(jìn)化樹構(gòu)建
    3 討論
    4 結(jié)論
第二章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的時空表達(dá)規(guī)律
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 梅山豬組織RNA提取與cDNA合成
        1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因組織表達(dá)特異性檢測
        1.5 Odf2,Odf3,Tektin4及Cabyr基因定量表達(dá)分析
        1.6 睪丸石蠟切片的制作
        1.7 附睪尾精子數(shù)測定
        1.8 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計
    2 結(jié)果與分析
        2.1 梅山豬Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的組織表達(dá)特征
        2.2 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因在不同日齡段睪丸的表達(dá)規(guī)律
        2.3 睪丸組織結(jié)構(gòu)
        2.4 梅山公豬附睪尾精子數(shù)測定
    3 討論
        3.1 Odf2,Odf3,Tektin4Cabyr基因組織表達(dá)特異性
        3.2 不同日齡梅山豬睪丸基因的表達(dá)與精子的發(fā)生
    4 結(jié)論
第三章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的亞細(xì)胞定位
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 重組表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
        1.4 融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)染NIH-3T3細(xì)胞
        1.5 融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)染后目的基因mRNA的RT-PCR檢測
        1.6 多克隆抗體的制備與檢測
    2 結(jié)果與分析
        2.1 重組表達(dá)載體的鑒定
        2.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NIH-3T3細(xì)胞
        2.3 RT-PCR檢測融合蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)
        2.4 pcDNA3.1重組載體質(zhì)粒鑒定
        2.5 間接免疫熒光檢測抗體的效價及亞細(xì)胞定位
    3 討論
    4 結(jié)論
第四章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的表達(dá)
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 精子RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        1.4 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA中的檢測
        1.5 間接免疫熒光檢測蛋白在成熟精子中的定位
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA的表達(dá)
        2.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的定位
    3 討論
    4 結(jié)論
第五章 豬精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)與鑒定
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 豬精原干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與純化
        1.4 精原干細(xì)胞的鑒定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 豬精原干細(xì)胞的形態(tài)和AKP染色
        2.2 標(biāo)記基因的檢測
    3 討論
    4 結(jié)論
第六章 利用豬和小鼠的SSCs驗證Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的功能
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 實驗設(shè)計
        1.3 半定量PCR檢測豬精原干細(xì)胞體外分化的影響
        1.4 熒光定量PCR檢測小鼠精原干細(xì)胞系體外分化的影響
    2 結(jié)果與分析
        2.1 轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后的精原干細(xì)胞
        2.2 轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因mRNA水平的鑒定
        2.3 過表達(dá)目的基因?qū)τ谪i精原干細(xì)胞體外分化的影響
        2.4 不同濃度的RA對于小鼠精原干細(xì)胞分化的影響
        2.5 RA誘導(dǎo)后過表達(dá)目的基因?qū)τ诰杉?xì)胞系體外分化的影響
    3 討論
        3.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr過表達(dá)對于豬精原干細(xì)胞體外分化的影響
        3.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr過表達(dá)對于小鼠精原干細(xì)胞系體外分化的影響
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
主要結(jié)論與意義
特色與創(chuàng)新點
不足及下一步工作建議
附圖
致謝
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本文編號：3071305