豬瘟病毒NS2、NS3和NS5A與豬Rab25蛋白的亞細胞定位分析
發(fā)布時間：2021-03-07 12:52
為了研究NS5A與Rab25的亞細胞定位及作用基因區(qū)段,先構(gòu)建pDsRed1-N1-Rab25紅光載體,利用經(jīng)過改造并加GFP的pcDNA3.1（+）-NS2、pcDNA3.1（+）-NS3和pcDNA3.1（+）-NS5A載體,將pDsRedN1-Rab25紅光載體與這3種綠光載體分別共轉(zhuǎn)染于豬血管內(nèi)皮細胞（SUVEC）,通過共聚焦顯微鏡觀察顯示Rab25和NS2、NS3共定位現(xiàn)象不明顯而與NS5A存在著明顯共定位。為了進一步研究NS5A與Rab25作用基因區(qū)段,構(gòu)建NS5A的3個分段基因載體:pEGFP-C1-NS5A-1-84、pEGFP-C1-NS5A-84-804和pEGFP-C1-NS5A-804-1 491,轉(zhuǎn)染SUVEC并觀察共定位情況,結(jié)果顯示Rab25與NS5A的804～1 491 bp存在明顯共定位,而與1～84,84～804 bp的共定位現(xiàn)象不明顯。結(jié)果說明Rab25與NS5A基因的804～1 491 bp存在共定位,這為繼續(xù)研究Rab25與NS5A的關(guān)鍵作用位點及互作奠定基礎(chǔ)。
【文章來源】：中國獸醫(yī)學(xué)報. 2020,40(04)北大核心
【文章頁數(shù)】：8 頁
【部分圖文】：
Rab25與NS5A各功能區(qū)共定位(10 μm)
CSFV屬于黃病毒科瘟病毒屬成員,是能造成嚴重經(jīng)濟損失的烈性傳染病[21]。1830-1833年,在印第安納的沃巴什河地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)CSFV,直到1860年,CSFV在歐洲和美洲廣泛流行。目前,很多國家已經(jīng)徹底根除CSFV。在我國豬瘟(CSF)兔化弱毒疫苗的應(yīng)用,有效控制急性CSF。但各種疾病的混合感染及慢性CSF較難從豬群中分離,使得這一類型疾病的發(fā)病率持續(xù)增加[22-23]。CSFV的致病機理較為復(fù)雜。在CSFV感染細胞以及復(fù)制的過程中涉及到很多Rab蛋白,如Rab1A與CSFV粒子組裝有關(guān),Rab5能誘導(dǎo)NS4B復(fù)合物的形成促進CSFV復(fù)制等[25]。Rab蛋白在細胞膜運輸中是一大類發(fā)揮調(diào)控功能的蛋白,參與多種重要致病性病毒的復(fù)制過程。Rab25作為一種參與蛋白轉(zhuǎn)運的蛋白[25],在CSFV復(fù)制中的作用還未知。圖5 Rab25與NS2、NS3和NS5A共定位(10 μm)
根據(jù)生物信息學(xué)對NS5A蛋白序列的分析結(jié)果和參閱關(guān)于HCV及BVDV的NS5A相關(guān)研究成果的基礎(chǔ)上[18-20],通過生物信息學(xué)官網(wǎng)http://smart.embl-heidelberg.de和http://scansite.mit.edu對NS5A蛋白進行生物信息學(xué)分析,初步明確CSFV NS5A蛋白的功能分區(qū)(圖1)。1.6 Rab25與NS5A功能區(qū)共定位的觀察
【參考文獻】：
期刊論文
[1]非典型豬瘟病毒SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 曹亮,田明堯,孫文超,郭丹丹,汪偉,魯會軍,劉云霞,鄭敏,錢愛東,金寧一. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 2019(04)
[2]2014-2018年廣西6種豬主要病毒性繁殖障礙疫病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 段群棚,陳忠偉,何穎,周英寧,李曉玉,梁家幸,閉炳芬,楊思儀,蔣冬福,盧敬專,李斌,秦毅斌,盧冰霞,蘇乾蓮,趙武. 中國畜牧獸醫(yī). 2019(02)
[3]規(guī)模化豬場豬瘟和偽狂犬病凈化效果的評價[J]. 胡玲玲,湯德元,曾智勇,王彬,黃濤,龍冬梅,石遠菊,楊偉,葉麗. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(11)
[4]激光共聚焦顯微技術(shù)在共定位應(yīng)用中的常見問題[J]. 王娟娟,魏學(xué)紅. 影像科學(xué)與光化學(xué). 2018(06)
[5]豬瘟的防治進展[J]. 曲軍. 農(nóng)業(yè)與技術(shù). 2018(03)
[6]激光共聚焦顯微鏡技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J]. 李琳,劉德旺,田野,黃林芳. 中成藥. 2017(05)
[7]FK506結(jié)合蛋白25及其突變體與CLIC1蛋白在真核細胞內(nèi)共定位的研究[J]. 何薇,耿慧武,左恒,阮操,潘林鑫,范禮斌,劉曉穎. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(10)
[8]蛋白質(zhì)互作研究技術(shù)[J]. 吳健,朱海霞,趙志荀,顏新敏,趙銀龍,吳娜,李健,張志東,張強,李影,吳國華. 動物醫(yī)學(xué)進展. 2016(02)
[9]激光掃描共聚焦顯微鏡的基本原理及其使用技巧[J]. 李葉,黃華平,林培群,崔艷梅,李勤奮,鄭勇奇. 電子顯微學(xué)報. 2015(02)
本文編號：3069128
【文章來源】：中國獸醫(yī)學(xué)報. 2020,40(04)北大核心
【文章頁數(shù)】：8 頁
【部分圖文】：
Rab25與NS5A各功能區(qū)共定位(10 μm)
CSFV屬于黃病毒科瘟病毒屬成員,是能造成嚴重經(jīng)濟損失的烈性傳染病[21]。1830-1833年,在印第安納的沃巴什河地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)CSFV,直到1860年,CSFV在歐洲和美洲廣泛流行。目前,很多國家已經(jīng)徹底根除CSFV。在我國豬瘟(CSF)兔化弱毒疫苗的應(yīng)用,有效控制急性CSF。但各種疾病的混合感染及慢性CSF較難從豬群中分離,使得這一類型疾病的發(fā)病率持續(xù)增加[22-23]。CSFV的致病機理較為復(fù)雜。在CSFV感染細胞以及復(fù)制的過程中涉及到很多Rab蛋白,如Rab1A與CSFV粒子組裝有關(guān),Rab5能誘導(dǎo)NS4B復(fù)合物的形成促進CSFV復(fù)制等[25]。Rab蛋白在細胞膜運輸中是一大類發(fā)揮調(diào)控功能的蛋白,參與多種重要致病性病毒的復(fù)制過程。Rab25作為一種參與蛋白轉(zhuǎn)運的蛋白[25],在CSFV復(fù)制中的作用還未知。圖5 Rab25與NS2、NS3和NS5A共定位(10 μm)
根據(jù)生物信息學(xué)對NS5A蛋白序列的分析結(jié)果和參閱關(guān)于HCV及BVDV的NS5A相關(guān)研究成果的基礎(chǔ)上[18-20],通過生物信息學(xué)官網(wǎng)http://smart.embl-heidelberg.de和http://scansite.mit.edu對NS5A蛋白進行生物信息學(xué)分析,初步明確CSFV NS5A蛋白的功能分區(qū)(圖1)。1.6 Rab25與NS5A功能區(qū)共定位的觀察
【參考文獻】：
期刊論文
[1]非典型豬瘟病毒SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 曹亮,田明堯,孫文超,郭丹丹,汪偉,魯會軍,劉云霞,鄭敏,錢愛東,金寧一. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 2019(04)
[2]2014-2018年廣西6種豬主要病毒性繁殖障礙疫病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 段群棚,陳忠偉,何穎,周英寧,李曉玉,梁家幸,閉炳芬,楊思儀,蔣冬福,盧敬專,李斌,秦毅斌,盧冰霞,蘇乾蓮,趙武. 中國畜牧獸醫(yī). 2019(02)
[3]規(guī)模化豬場豬瘟和偽狂犬病凈化效果的評價[J]. 胡玲玲,湯德元,曾智勇,王彬,黃濤,龍冬梅,石遠菊,楊偉,葉麗. 中國獸醫(yī)學(xué)報. 2018(11)
[4]激光共聚焦顯微技術(shù)在共定位應(yīng)用中的常見問題[J]. 王娟娟,魏學(xué)紅. 影像科學(xué)與光化學(xué). 2018(06)
[5]豬瘟的防治進展[J]. 曲軍. 農(nóng)業(yè)與技術(shù). 2018(03)
[6]激光共聚焦顯微鏡技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J]. 李琳,劉德旺,田野,黃林芳. 中成藥. 2017(05)
[7]FK506結(jié)合蛋白25及其突變體與CLIC1蛋白在真核細胞內(nèi)共定位的研究[J]. 何薇,耿慧武,左恒,阮操,潘林鑫,范禮斌,劉曉穎. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(10)
[8]蛋白質(zhì)互作研究技術(shù)[J]. 吳健,朱海霞,趙志荀,顏新敏,趙銀龍,吳娜,李健,張志東,張強,李影,吳國華. 動物醫(yī)學(xué)進展. 2016(02)
[9]激光掃描共聚焦顯微鏡的基本原理及其使用技巧[J]. 李葉,黃華平,林培群,崔艷梅,李勤奮,鄭勇奇. 電子顯微學(xué)報. 2015(02)
本文編號：3069128
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3069128.html
最近更新
教材專著
