H9N2亞型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）自首次分離至今,已在全世界各地造成了廣泛的傳播。在國內,H9N2亞型AIV呈地方性流行且傳播范圍廣,不但給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失,也給公共衛(wèi)生安全造成潛在的威脅。在免疫壓力和抗原漂移作用下,AIV容易發(fā)生抗原變異,最終導致免疫失敗。因此研發(fā)針對H9N2亞型AIV較為理想的單抗對H9亞型AIV監(jiān)測和診斷有重要的意義。1.H9N2亞型禽流感病毒HA和NP基因的克隆及表達選取 H9N2 AIV 流行株 A/Chicken/Taixing/10/2010（簡稱 rTX）和疫苗株A/Chicken/Shanghai/F/98（簡稱F98）作為研究對象,通過PCR分別擴增其HA基因和NP基因,將其克隆到真核表達載體PCAGGS上,成功構建出重組質粒PCAGGS-rTX-HA、PCAGGS-F98-HA 和 PCAGGS-rTX-NP。然后將其轉染入 293T 細胞,通過間接免疫熒光試驗（Indirect immunofluorescence assay,IFA）和蛋白印跡試驗（Western blot,WB）檢測確定HA... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１流感病毒粒子的形態(tài)結構（引自張劍２０１６）??Ｆｉｇ?１?．Ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ｖｉｒｕｓ??

?第一章Ｈ９Ｎ２亞型禽流感病毒ＨＡ和ＮＰ基因克隆及表達???以毒株ｒＴＸ和Ｆ９８的ｃＤＮＡ為模版，用對應的引物進行ＰＣＲ擴増，ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)１?％??瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳結果如圖１－１和圖１－２所示，擴增出大約１７００?ｂｐ左右的??ＨＡ片段和１５００?ｂｐ左右ＮＰ片段，結果與預期相符。??Ｍ?１?２??２０００ｂｐ?—??ｉ?ＯＯＯｂｐ?——??圖１－１?ＨＡ片段的ＰＣＲ擴增圖??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ?毒株的?ＨＡ?片段；２：?Ｆ９８?毒株的?ＨＡ?片段；??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＡ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ－ＨＡ；?２：?Ｆ９８－ＨＡ；??ｌＯＯＯｂｐ－丨?＇￣１４９７ｂｐ??圖１－２?ＮＰ片段的ＰＣＲ擴增圖??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｈ?ｒＴＸ?毒株的?ＮＰ?片段；??Ｆｉｇ．?１－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮＰ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ－ＮＰ；??３．１．２酶切鑒定??將ＨＡ基因和ＮＰ基因真核重組質粒的酶切產(chǎn)物用１?％瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定，??結果顯示：ＰＣＡＧＧＳ－ｒＴＸ－ＨＡ和ＰＣＡＧＧＳ－Ｆ９８－ＨＡ重組質粒酶切圖中出現(xiàn)兩條大小分??別為１７００?ｂｐ左右和４７００?ｂｐ左右的條帶（圖１－３）：?ＰＣＡＧＧＳ－ｒＴＸ－ＮＰ重組質粒酶切圖??中出現(xiàn)兩條大小分別為１５００?ｂｐ左右和４７００?ｂｐ左右的條帶（圖１－４），所得結果與預期??一致。比對測序驗證結果得出插入的目的基因序列也和原始序列

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【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[10]雞傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立[D]. 張林.揚州大學 2016



本文編號：3067598