血吸蟲病與利什曼原蟲病、瘧疾、絲蟲病、錐蟲病和麻風(fēng)病共同確定為六大重點(diǎn)熱帶病,至今仍是亟待解決的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。肝臟蟲卵肉芽腫是血吸蟲感染的一個(gè)重要病理特征,其病理基礎(chǔ)是蟲卵及其孵化毛蚴釋放抗原刺激宿主免疫系統(tǒng),引發(fā)的由CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的,蟲卵周圍大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的超敏反應(yīng)。研究表明含EF-hand手性域的分子可以誘導(dǎo)小鼠模型產(chǎn)生一定的抗血吸蟲免疫病理保護(hù),而其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制仍不清楚。因此我們挖掘大量已有數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)日本血吸蟲EF手性分子SJCHGC06822分子可能通過(guò)APC提呈活化不同的CD4+T細(xì)胞,調(diào)節(jié)日本血吸蟲肝臟蟲卵肉芽腫炎癥反應(yīng)。本研究旨在探索日本血吸蟲SJCHGC06822分子調(diào)節(jié)蟲卵周圍炎性反應(yīng)的機(jī)制。1、日本血吸蟲SJCHGC06822基因的克隆、生物信息學(xué)分析、原核表達(dá)以及免疫原性初步鑒定。利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆和表達(dá)日本血吸蟲SJCHGC06822分子,生物信息學(xué)分析該分子結(jié)構(gòu),His-Ni柱純化rSJCHGC06822/His蛋白,制備小鼠多抗,western blot分析該蛋白免疫原性。依據(jù)Genbank載入序列設(shè)計(jì)引物,PCR成功擴(kuò)增出591bp完... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

曼氏血吸蟲/日本血吸蟲肝臟蟲卵肉芽腫細(xì)胞成分模式圖(引自GeoffreyN.Gobert)

圖2.1A目的基因的PCR擴(kuò)增；圖2.丨BpET28a(+)-SJCHGC06822雙Fig2.1AThe application of SJCHGC06822 gene by PCRFig2.1B Restriction enzyme analysis of recombinant vector pET28a(+)-SJCMl： DLMarker2000： M2： DLMarker 10 000；】：SJCHGC06822 基因iBamH I 和 Xhol I 雙酶切 pET28a(+)-SJCHGC06822 產(chǎn)物M1:DL Marker 2000; M2:DL Marker 10 000; 1: The application of SJCHGC02: pET28a(+)- SJCHGC06822 digested with restriction enzyme BamH I anGC06822基因生物信息學(xué)分析結(jié)果 Compute pI/Mw tool分析結(jié)果顯示：SJCHGC06822基閃編碼19,等電點(diǎn)7.67。將SJCHGC06822分子蛋白序列進(jìn)行Blastp比對(duì)，血吸蟲21.7kDa蛋內(nèi)(ANN39280.1 )相似度高達(dá)97%，勾牛血68.1)日本血吸蟲 Sj22 蛋白（CAA55312.1 )、曼氏血吸蟲 Sm21.7 ，大丁- 80%oScanProsite分析顯示SJCHGC06822在37-72處有一lP4.1 Server在線分析顯示SJCHGC06822分子無(wú)信號(hào)肽結(jié)構(gòu)，TCHGC06822分子無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)。

圖 2.3 The signal peptide analysis of SJCHGC06822 proteinpxjfet^ricr probabilibes for SJCHCjCO'38221 ■0.8 ?


本文編號(hào)：3066101