發(fā)布時(shí)間：2021-03-05 20:28

　　【目的】評(píng)價(jià)健康奶牛生殖道分離乳酸菌益生特性,發(fā)掘其作為益生菌制劑細(xì)菌成分的可能性,為開(kāi)發(fā)防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的微生態(tài)制劑提供科學(xué)依據(jù)�！痉椒ā恳灾蹦c把握法無(wú)菌采集產(chǎn)后40～60 d健康奶牛子宮分泌物,采用MRS培養(yǎng)基在厭氧條件（氧氣濃度<1.2%,37℃）下分離乳酸菌,通過(guò)擴(kuò)增16S r DNA序列進(jìn)行鑒定,并進(jìn)行抑菌活性、耐藥性、黏附子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞特性及安全性評(píng)估,分析其開(kāi)發(fā)成益生菌制劑的可能性�！窘Y(jié)果】經(jīng)16S r DNA測(cè)序分析共獲得8株乳酸菌,分別為植物乳桿菌、副干酪乳桿菌、蠟樣芽孢桿菌、鼠李糖桿菌、蒙氏腸球菌、德氏乳桿菌、戊糖乳桿菌和嗜熱鏈球菌,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果選取其中3株（植物乳桿菌、副干酪乳桿菌和鼠李糖桿菌）進(jìn)行益生特性評(píng)價(jià)。3株奶牛生殖道乳酸菌培養(yǎng)上清液對(duì)大腸桿菌、無(wú)乳鏈球菌及金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)出良好的抑制效果,約在接種3 h后進(jìn)入典型的指數(shù)生長(zhǎng)期,生長(zhǎng)至平臺(tái)期后植物乳桿菌OD_{620 nm}為1.375、鼠李糖桿菌OD_{620 nm}為1.314、副干酪乳桿菌OD_{620 nm}為1.250。副干酪乳桿菌的... 

【文章來(lái)源】：南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,51(09)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

乳酸菌16S r DNA的PCR擴(kuò)增電泳結(jié)果

3株奶牛生殖道乳酸菌均隨生長(zhǎng)時(shí)間的推移，其菌體濃度逐漸增加，約在接種3 h后即進(jìn)入典型的指數(shù)生長(zhǎng)期，至接種9 h后生長(zhǎng)曲線(xiàn)趨于平坦，在接種13～14 h時(shí)達(dá)最大值（圖4）。乳酸菌生長(zhǎng)至平臺(tái)期后，植物乳桿菌OD620 nm為1.375，鼠李糖桿菌OD620 nm為1.314，副干酪乳桿菌OD620 nm為1.250。由圖5可看出，3株奶牛生殖道乳酸菌的產(chǎn)酸情況在接種14～16 h時(shí)達(dá)平臺(tái)期，但在接種16 h后發(fā)酵液p H還在繼續(xù)降低，直到接種24 h后發(fā)酵液p H才趨于穩(wěn)定，說(shuō)明植物乳桿菌、副干酪乳桿菌和鼠李糖桿菌在接種16 h后其產(chǎn)酸過(guò)程仍在繼續(xù)，并于接種24 h時(shí)達(dá)產(chǎn)酸最大值。其中，副干酪乳桿菌最先到達(dá)穩(wěn)定期且產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，其發(fā)酵液p H達(dá)3.68；植物乳桿菌和鼠李糖桿菌的產(chǎn)酸能力幾乎相同，發(fā)酵結(jié)束后其p H分別為3.80和3.82。此外，植物乳桿菌、副干酪乳桿菌和鼠李糖桿菌在MRS培養(yǎng)基上形成的菌落顏色均無(wú)明顯變化，說(shuō)明不產(chǎn)H2O2。

由圖5可看出，3株奶牛生殖道乳酸菌的產(chǎn)酸情況在接種14～16 h時(shí)達(dá)平臺(tái)期，但在接種16 h后發(fā)酵液p H還在繼續(xù)降低，直到接種24 h后發(fā)酵液p H才趨于穩(wěn)定，說(shuō)明植物乳桿菌、副干酪乳桿菌和鼠李糖桿菌在接種16 h后其產(chǎn)酸過(guò)程仍在繼續(xù)，并于接種24 h時(shí)達(dá)產(chǎn)酸最大值。其中，副干酪乳桿菌最先到達(dá)穩(wěn)定期且產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，其發(fā)酵液p H達(dá)3.68；植物乳桿菌和鼠李糖桿菌的產(chǎn)酸能力幾乎相同，發(fā)酵結(jié)束后其p H分別為3.80和3.82。此外，植物乳桿菌、副干酪乳桿菌和鼠李糖桿菌在MRS培養(yǎng)基上形成的菌落顏色均無(wú)明顯變化，說(shuō)明不產(chǎn)H2O2。圖4 奶牛生殖道乳酸菌的生長(zhǎng)曲線(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]病原菌診斷技術(shù)及其在奶牛子宮內(nèi)膜炎中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 邵丹,張世棟,武小虎,王東升,董書(shū)偉,桑夢(mèng)琪,喻琴,嚴(yán)作廷.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]2種微生態(tài)制劑對(duì)烏鱧生長(zhǎng)性能、腸道形態(tài)及免疫功能的影響[J]. 楊虹,謝明寶,于輝,農(nóng)興新,楊文豪,楊映.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[3]貴州省豬源大腸桿菌對(duì)磺胺類(lèi)抗菌藥物耐藥性及耐藥基因檢測(cè)[J]. 寇宏,呂世明,譚艾娟,王想,張順然,羅致茜,林習(xí),楊睿智.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2018(09)
[4]新疆奶牛子宮內(nèi)膜炎大腸桿菌進(jìn)化分群及耐藥特性研究[J]. 馬帥,喬軍,孟慶玲,伍曄暉,王熙鳳,郭晶,蔡擴(kuò)軍,王登峰,才學(xué)鵬.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(07)
[5]健康奶牛子宮頸乳酸菌篩選方法的建立及其抑菌活性分析[J]. 桑夢(mèng)琪,喻琴,邵丹,董書(shū)偉,王東升,張世棟,武小虎,嚴(yán)作廷.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(06)
[6]乳酸菌粘附特性的研究新進(jìn)展[J]. 佘銀,羅芳,高婉茹,李鑫,劉霞.  食品研究與開(kāi)發(fā). 2018(04)
[7]健康奶牛陰道乳酸菌的分離與鑒定[J]. 朱芬花,馮秉福,羅永珍,范秀蘭.  畜牧與獸醫(yī). 2017(09)
[8]嗜酸乳桿菌體外黏附山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞條件的優(yōu)化[J]. 白東寧,齊雪峰,趙獻(xiàn)軍,段連茂,靳亞平,李義,王大會(huì),王芳.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(03)

博士論文
[1]益生乳酸桿菌的黏附及免疫調(diào)節(jié)作用研究[D]. 任大勇.吉林大學(xué) 2013

碩士論文
[1]三重LAMP檢測(cè)禽源沙門(mén)氏菌、大腸桿菌磺胺耐藥基因（sul1、sul2、sul3）研究[D]. 莊林林.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[2]奶牛生殖道內(nèi)益生乳酸菌的分離、篩選及功能特性研究[D]. 李向楠.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]奶牛生殖道菌群分析和乳酸菌的分離與鑒定及其生物學(xué)特性研究[D]. 侯榮倫.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]奶牛子宮內(nèi)膜炎菌群分析及微生態(tài)制劑對(duì)其療效觀(guān)察[D]. 李炳志.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008



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