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TRIM62抑制禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染的作用

發(fā)布時間:2021-03-05 18:22
  網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)屬于禽反轉(zhuǎn)錄病毒,除形成腫瘤外,還可導(dǎo)致免疫抑制,引起繼發(fā)感染和混合感染頻發(fā),造成養(yǎng)禽業(yè)重大損失,目前尚未有商品化應(yīng)用的疫苗或藥物。TRIM62是TRIM/RBCC家族的一員,包括TRIM家族高度保守的RING、B-box、Coiled coil結(jié)構(gòu)域,其C-末端為SPRY結(jié)構(gòu)域。TRIM家族的很多蛋白都具有抗反轉(zhuǎn)錄病毒的作用,且其作用機(jī)制與其結(jié)構(gòu)域密切相關(guān)。作為一種天然免疫因子,TRIM62在其他物種上的抗反轉(zhuǎn)錄病毒作用已有一定研究,如人TRIM62蛋白抗HIV-1復(fù)制,且其RING結(jié)構(gòu)域缺失加強(qiáng)其對HIV-1的抑制等;诖,本研究設(shè)計實驗,研究雞TRIM62對反轉(zhuǎn)錄病毒REV復(fù)制的抑制作用,明確其結(jié)構(gòu)域的影響,分析TRIM62在抑制REV復(fù)制過程中的互作蛋白,為深入研究雞TRIM62抑制禽反轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。通過熒光定量PCR和Western Blot檢測接毒不同時間點的細(xì)胞以及雞各組織中TR IM62表達(dá),明確REV復(fù)制對TRIM62表達(dá)的影響以及二者間關(guān)聯(lián)性;分別轉(zhuǎn)染TRIM62... 

【文章來源】:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】:71 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

TRIM62抑制禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染的作用


不同接毒時間TRIM62蛋白表達(dá)以及REV轉(zhuǎn)錄水平Fig.1ExpressionofTRIM62proteinandthelevelofREVtranscriptionatdifferenttimeofexposureA:REV接毒細(xì)胞TRIM62轉(zhuǎn)錄B:REV接毒細(xì)胞REV轉(zhuǎn)錄C:TRIM62的WesternBlot檢測結(jié)果,1—6分別為正常、接毒12h、接毒24h、接毒48h、接毒72h、接毒96h細(xì)

雞組織,法氏囊,骨髓,轉(zhuǎn)錄水平


1-6 is normal, 12h of poisoning, 24h of poisoning, 48h of poisoning, 72h of poisoning, 96h of virus3.2 REV 感染后雞不同組織中 TRIM62 表達(dá)變化我們分別檢測REV感染不同時間雞不同組織REV和TRIM62的表達(dá),如圖2 所示,第一周時,肝(A)、腎(B)、脾(C)、法氏囊(E)的病毒轉(zhuǎn)錄呈現(xiàn)極顯著上升,此時接毒組比正常組的蛋白轉(zhuǎn)錄有所下降;此時間點的腦(D)中幾乎無病毒復(fù)制,骨髓(F)的病毒有復(fù)制但不如其他組織的顯著,而蛋白轉(zhuǎn)錄也幾乎無大變化。第三周時,肝(A)的病毒復(fù)制增加但趨勢相對減緩,脾(C)中的病毒復(fù)制與第一周幾乎無大變化,而接毒組肝(A)、脾(C)的蛋白轉(zhuǎn)錄比正常組有所升高不過并不顯著;腎(B)

效果圖,慢病毒,重組載體,轉(zhuǎn)染


圖 3 TRIM62 慢病毒重組載體轉(zhuǎn)染效果Fig.3 Transfection effect of TRIM62 lentivirus recombinant vectorA:Normal 空白對照 B:LV-Negative(108TU/mL)轉(zhuǎn)染 C:LV-TRIM62(108TU/mL)轉(zhuǎn)染A: Normal blank control B: LV-Negative (108TU/mL) transfection C: LV-TRIM62 (108TU/mL) transfection.2 TRIM62 表達(dá)增加抑制病毒表達(dá)無論是在正常細(xì)胞還是接毒細(xì)胞,LV-TRIM62 慢病毒重組載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的 TRI顯著高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞(4A),TRIM62 過表達(dá)細(xì)胞的病毒表達(dá)顯著(P<0.01轉(zhuǎn)染細(xì)胞(4B)。由此可知,TRIM62 過表達(dá)會顯著抑制病毒表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】:
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本文編號:3065649

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