網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）屬于禽反轉(zhuǎn)錄病毒,除形成腫瘤外,還可導(dǎo)致免疫抑制,引起繼發(fā)感染和混合感染頻發(fā),造成養(yǎng)禽業(yè)重大損失,目前尚未有商品化應(yīng)用的疫苗或藥物。TRIM62是TRIM/RBCC家族的一員,包括TRIM家族高度保守的RING、B-box、Coiled coil結(jié)構(gòu)域,其C-末端為SPRY結(jié)構(gòu)域。TRIM家族的很多蛋白都具有抗反轉(zhuǎn)錄病毒的作用,且其作用機(jī)制與其結(jié)構(gòu)域密切相關(guān)。作為一種天然免疫因子,TRIM62在其他物種上的抗反轉(zhuǎn)錄病毒作用已有一定研究,如人TRIM62蛋白抗HIV-1復(fù)制,且其RING結(jié)構(gòu)域缺失加強(qiáng)其對HIV-1的抑制等�；诖�,本研究設(shè)計實驗,研究雞TRIM62對反轉(zhuǎn)錄病毒REV復(fù)制的抑制作用,明確其結(jié)構(gòu)域的影響,分析TRIM62在抑制REV復(fù)制過程中的互作蛋白,為深入研究雞TRIM62抑制禽反轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。通過熒光定量PCR和Western Blot檢測接毒不同時間點的細(xì)胞以及雞各組織中TR IM62表達(dá),明確REV復(fù)制對TRIM62表達(dá)的影響以及二者間關(guān)聯(lián)性;分別轉(zhuǎn)染TRIM62... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同接毒時間TRIM62蛋白表達(dá)以及REV轉(zhuǎn)錄水平Fig.1ExpressionofTRIM62proteinandthelevelofREVtranscriptionatdifferenttimeofexposureA：REV接毒細(xì)胞TRIM62轉(zhuǎn)錄B：REV接毒細(xì)胞REV轉(zhuǎn)錄C：TRIM62的WesternBlot檢測結(jié)果，1—6分別為正常、接毒12h、接毒24h、接毒48h、接毒72h、接毒96h細(xì)

1-6 is normal, 12h of poisoning, 24h of poisoning, 48h of poisoning, 72h of poisoning, 96h of virus3.2 REV 感染后雞不同組織中 TRIM62 表達(dá)變化我們分別檢測REV感染不同時間雞不同組織REV和TRIM62的表達(dá)，如圖2 所示，第一周時，肝（A）、腎（B）、脾（C）、法氏囊（E）的病毒轉(zhuǎn)錄呈現(xiàn)極顯著上升，此時接毒組比正常組的蛋白轉(zhuǎn)錄有所下降；此時間點的腦（D）中幾乎無病毒復(fù)制，骨髓（F）的病毒有復(fù)制但不如其他組織的顯著，而蛋白轉(zhuǎn)錄也幾乎無大變化。第三周時，肝（A）的病毒復(fù)制增加但趨勢相對減緩，脾（C）中的病毒復(fù)制與第一周幾乎無大變化，而接毒組肝（A）、脾（C）的蛋白轉(zhuǎn)錄比正常組有所升高不過并不顯著；腎（B）

圖 3 TRIM62 慢病毒重組載體轉(zhuǎn)染效果Fig.3 Transfection effect of TRIM62 lentivirus recombinant vectorA:Normal 空白對照 B:LV-Negative（108TU/mL）轉(zhuǎn)染 C:LV-TRIM62（108TU/mL）轉(zhuǎn)染A: Normal blank control B: LV-Negative (108TU/mL) transfection C: LV-TRIM62 (108TU/mL) transfection.2 TRIM62 表達(dá)增加抑制病毒表達(dá)無論是在正常細(xì)胞還是接毒細(xì)胞，LV-TRIM62 慢病毒重組載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的 TRI顯著高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞（4A），TRIM62 過表達(dá)細(xì)胞的病毒表達(dá)顯著（P＜0.01轉(zhuǎn)染細(xì)胞（4B）。由此可知，TRIM62 過表達(dá)會顯著抑制病毒表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3065649