由于許多化學(xué)合成藥物的較強的毒副作用,人們越來越重視從天然提取物中開發(fā)毒副作用較小的抗炎藥物,尋求安全有效的抗炎提取物,是防治該類疾病的新思路,也是新型抗炎飼料添加劑開發(fā)的新熱點。本試驗以LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)信號通路為主線,研究梔子對炎癥應(yīng)激仔豬炎癥通路及細胞因子水平變化的影響,體外建立仔豬腸上皮細胞應(yīng)激模型,研究梔子提取物京尼平苷對豬腸上皮細胞炎癥通路、緊密連接等水平的影響,為預(yù)防仔豬免疫應(yīng)激及各種腸道疾病提供新思路。體內(nèi)試驗部分選取24頭體重相近斷奶仔豬隨機分為四組,每組6頭,預(yù)飼3天,3個梔子添加組每頭每天在基礎(chǔ)日糧中分別添加梔子粉1.25、2.5、5 g,自由飲水,采食,第10天稱重,前腔靜脈采血后注射LPS,并在注射后3h、24 h采血。分離血清和淋巴細胞。測定淋巴細胞中NF-κB通路和IAP蛋白表達量、mRNA相對表達量和血清中8種細胞因子的變化水平。體外試驗部分將IPEC-J2細胞以合適濃度細胞液進行鋪板,分別為空白組,模型組,0.1、1、10 mmol/L濃度京尼平苷添加組,37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱24 h,除對照組外每孔加入20μL0.1 m... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

注射前仔豬淋巴細胞NF

日糧中添加不同劑量梔子對LPS誘導(dǎo)免疫應(yīng)激仔豬淋巴細胞相關(guān)炎癥蛋白及mRNA表達量的影響19ABCDEF圖2注射前仔豬淋巴細胞NF-κB通路及IAP相關(guān)蛋白表達量Figure2NF-κBpathwayandIAPproteinexpressioninpigletlymphocytesbeforeinjection(A/B)p65蛋白表達量(A/C)磷酸化p65蛋白表達量(A/D)IκB蛋白表達量(A/E)磷酸化IκB蛋白表達量(A/F)IAP蛋白表達量(A/B)p65proteinexpressionlevel(A/C)Phosphorylationlevelofp65(A/D)IκBproteinexpressionlevel(A/E)PhosphorylationlevelofIκB(A/F)IAPproteinexpressionlevel注：*表示與對照組相比，蛋白表達量差異顯著（P<0.05）；**表示與對照組相比，蛋白表達量差異極顯著（P<0.01）Note:*indicatesasignificantdifferenceinproteinexpressioncomparedwiththecontrolgroup(P<0.05).**indicatesthatcomparedwiththecontrolgroup,theproteinexpressionlevelisextremelysignificantdifferent(P<0.01)結(jié)果表明，在注射LPS前，即飼喂梔子10天后，各試驗組與對照組相比，斷奶仔豬外周血單核淋巴細胞中NF-κBp65、磷酸化p65（P-p65）、IAP、IκB及磷酸化IκB（P-IκB）蛋白表達受到了梔子添加的不同影響。與對照組相比，三個梔子添加組的NF-κBp65蛋白表達量均顯著低于對照組（P<0.05），且隨梔子添加量減少而表達量降低；低劑量和中劑量梔子添加組P-p65蛋白表達量在顯著低于對照組（P<0.05），高劑量梔子添加組P-p65的蛋白表達量略低于對照組，但差異不明顯（P>0.05）；低劑量梔子添加組的IκB蛋白顯著降低（P<0.05），中、高劑量梔子添加組的IκB蛋白表達量與對照組相比無顯著差異（P>0.05）；但低、中、高劑量梔子添加組P-IκB蛋白表達量均顯著低于對照組（P<0.05），且高劑量添

梔子及其提取物對免疫應(yīng)激仔豬及IPEC-J2細胞相關(guān)炎癥通路的影響20加組P-IκB蛋白表達量最低（P<0.05）；同時，低劑量和中劑量梔子添加組IAP蛋白表達量顯著低于對照組（P<0.05），而高劑量梔子對IAP表達沒有顯著影響（P>0.05）。(2)注射后3hABCDEF圖3注射后3h仔豬淋巴細胞NF-κB通路及IAP相關(guān)蛋白表達量Figure3NF-κBpathwayandIAPproteinexpressioninpigletlymphocytes3hafterinjection(A/B)p65蛋白表達量(A/C)磷酸化p65蛋白表達量(A/D)IκB蛋白表達量(A/E)磷酸化IκB蛋白表達量(A/F)IAP蛋白表達量(A/B)p65proteinexpressionlevel(A/C)Phosphorylationlevelofp65(A/D)IκBproteinexpressionlevel(A/E)PhosphorylationlevelofIκB(A/F)IAPproteinexpressionlevel注：*表示與對照組相比，蛋白表達量差異顯著（P<0.05）；**表示與對照組相比，蛋白表達量差異極顯著（P<0.01）Note:*indicatesasignificantdifferenceinproteinexpressioncomparedwiththecontrolgroup(P<0.05).**indicatesthatcomparedwiththecontrolgroup,theproteinexpressionlevelisextremelysignificantdifferent(P<0.01)結(jié)果表明，在注射LPS之后3h，與炎癥對照組相比，三個梔子添加組NF-κBp65蛋白表達量沒有顯著變化（P>0.05）；低中劑量梔子添加組P-p65的蛋白表達量無明顯變化（P>0.05），但高劑量梔子添加組P-p65的蛋白表達量顯著減低（P<0.05）；低劑量梔子添加組的IκB蛋白顯著低于對照組（P<0.05），中高劑量梔子添加組IκB蛋白變化不明顯（P>0.05）；低中劑量梔子添加組P-IκB蛋白表達量無明顯變化，但是高劑量梔子添加組中

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3061990