利用反向遺傳技術(shù)拯救了H9N2亞型流感病毒NS1蛋白效應(yīng)區(qū)第114,124,202和212位的定點(diǎn)突變病毒。病毒感染后9 h,熒光定量PCR結(jié)果顯示,當(dāng)NS1蛋白發(fā)生P114S、M124V、S212P氨基酸置換后,可以顯著抑制IFN-β及RIG-1、PKR、OAS1、Mx1和ISG15等干擾素刺激基因（ISGs） mRNA的轉(zhuǎn)錄活性。由此表明,NS1蛋白的114,124和212位點(diǎn)與H9N2亞型流感病毒拮抗宿主先天性免疫應(yīng)答密切相關(guān)。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

G1毒株反向遺傳重組質(zhì)粒凝膠電泳結(jié)果

將8質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞上清經(jīng)MDCK細(xì)胞增殖后,血凝試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)NS1氨基酸位點(diǎn)未置換病毒及4株NS1氨基酸位點(diǎn)置換病毒均具有血凝活性(圖2)。提取血凝結(jié)果陽性細(xì)胞上清RNA,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增拯救病毒的NS基因�；驕y序結(jié)果顯示,NS1蛋白的114位由核苷酸CCC編碼的氨基酸P置換為TCC編碼的S,124位由ATG編碼的M置換為GTG編碼的V,202位由ACT編碼的T置換為GCT編碼的A,212位由TCT編碼的S置換為CCT編碼的P,所有置換位點(diǎn)均與預(yù)期相符。將拯救的5株病毒分別命名為:NS1基因未突變的親本毒株reG1、NS1基因位點(diǎn)置換毒株reG1-NS1P114S、reG1-NS1M124V、reG1-NS1T202A和reG1-NS1S212P。2.3 拯救病毒TCID50測定結(jié)果

利用IFN-β ELISA檢測試劑盒,分別測定病毒感染后4,8,12,24 h的細(xì)胞上清液中IFN-β的表達(dá)水平。如圖3所示,在病毒感染后4,8,12 h,reG1-NS1P114S、reG1-NS1M124V、reG1-NS1S212P感染組IFN-β表達(dá)水平與reG1相比,均受到顯著性抑制(P<0.05～0.01);而reG1-NS1T202A感染組與reG1相比,IFN-β表達(dá)水平無顯著差異(P>0.05)。但在病毒感染后24 h,所有NS1突變組與reG1相比,均差異不顯著(P>0.05)。由此說明,NS1在病毒感染早期對IFN-β的拮抗能力更強(qiáng)。2.5 拯救病毒感染細(xì)胞后IFN-β及ISGs的mRNA轉(zhuǎn)錄水平變化


本文編號：3061509