病毒離子孔道蛋白（Viroporins）是由病毒編碼的一類小分子量、疏水性跨膜蛋白。它們一般由50-120個氨基酸殘基組成,至少有一個疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域。這些疏水性跨膜區(qū)能夠與宿主細胞內(nèi)的磷脂雙分子層相互作用并使磷脂雙分子層擴散。離子孔道蛋白參與破壞宿主細胞的形態(tài)并擾亂宿主細胞的生理學(xué)功能以保證病毒能夠完成其完整的生命周期。小RNA病毒科腸道病毒屬病毒編碼的2B蛋白具有寡聚化形成跨膜孔道、增加宿主細胞膜通透性、擾亂宿主細胞Ca2+體內(nèi)平衡、誘導(dǎo)宿主細胞發(fā)生自噬以及誘導(dǎo)宿主細胞的凋亡等viroporin特性。本研究中,以小RNA病毒科腸道病毒屬中的脊髓灰質(zhì)炎病毒和柯薩奇病毒的2B蛋白研究為參考,借鑒多種病毒離子孔道蛋白的研究方法,對口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2B的結(jié)構(gòu)特性和功能展開初步研究。1.運用在線預(yù)測軟件對2B蛋白氨基酸序列進行預(yù)測,結(jié)果顯示,亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B基因含有462 bp,總共編碼154個氨基酸。整條肽鏈擁有兩個疏水區(qū),分別為氨基酸83-104和氨基酸119-137。構(gòu)建pXJ-FLAG-2B, pXJ-2B-HA及pXJ-2BΔ（110-111）等帶有不同標簽的重組質(zhì)粒在B... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1. 前言
    2. 腸道病毒2B蛋白的翻譯
    3. 腸道病毒2B蛋白的跨膜拓撲結(jié)構(gòu)
    4. 腸道病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2B離子孔道特性對宿主細胞的影響
        4.1 增加宿主細胞的膜結(jié)構(gòu)通透性
2+平衡">        4.2 擾亂宿主細胞內(nèi)Ca²⁺平衡
        4.3 誘導(dǎo)宿主細胞凋亡
        4.4 誘導(dǎo)細胞自噬
    5. 基于2B蛋白的抗病毒藥物研究
    6. 展望
第二章 口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2B的結(jié)構(gòu)特性研究
    1. 材料
        1.1 質(zhì)粒和細胞
        1.2 主要試劑及儀器
    2. 方法
        2.1 亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白2B的在線結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3 亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白單體的跨膜方式研究
            2.3.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及細胞培養(yǎng)
            2.3.2 熒光觀察
        2.4 亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白單體的亞細胞定位研究
            2.4.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及細胞培養(yǎng)
            2.4.2 熒光觀察
        2.5 亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白單體的相互作用研究
            2.5.1 2B蛋白單體在真核細胞內(nèi)的相互作用
            2.5.2 2B蛋白單體體外寡聚化作用
                2.5.2.1 2B蛋白的原核表達及純化
                2.5.2.2 2B蛋白的體外寡聚化作用
    3. 結(jié)果
        3.1 2B蛋白疏水性跨膜區(qū)預(yù)測
        3.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.3 2B蛋白單體在細胞中的跨膜拓撲結(jié)構(gòu)
        3.4 2B蛋白單體在細胞中的亞細胞定位
        3.5 2B蛋白單體的相互作用
            3.5.1 2B蛋白在細胞內(nèi)的相互作用
            3.5.2 2B蛋白在細胞外的相互作用
                3.5.2.1 2B蛋白在大腸桿菌C43（DE3）中的可溶性表達及純化
                3.5.2.2 2B蛋白的細胞外寡聚化作用
    4. 討論
第三章 口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2B的功能特性研究
    1. 材料
        1.1 質(zhì)粒和細胞
        1.2 主要試劑及儀器
    2. 方法
        2.1 2B蛋白在大腸桿菌中毒性分析
            2.1.1 2B蛋白對大腸桿菌的增殖影響
            2.1.2 2B蛋白在大腸桿菌中的表達觀察
2+的影響">        2.2 2B蛋白對BHK-21細胞內(nèi)Ca²⁺的影響
        2.3 2B蛋白引發(fā)細胞發(fā)生自噬研究
    3. 結(jié)果
        3.1 2B蛋白對大腸桿菌的毒性分析
            3.1.1 大腸桿菌BL21（DE3）和C43（DE3）的增殖
            3.1.2 2B蛋白在大腸桿菌BL21（DE3）和C43（DE3）中的表達
2+的影響">        3.2 2B蛋白對BHK-21細胞內(nèi)Ca²⁺的影響
        3.3 2B蛋白誘導(dǎo)細胞發(fā)生自噬
            3.3.1 Western-blot檢測表達2B蛋白的BHK-21細胞內(nèi)的LC3的切割
            3.3.2 免疫熒光法觀察LC3在BHK-21細胞內(nèi)的集聚
            3.3.3 熒光觀察LC3在H1299（GFP-LC3）細胞內(nèi)的集聚
    4. 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[9]口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3AB基因的可溶性表達與反應(yīng)原性的鑒定[J]. 祝秀梅,盧曾軍,胡永浩,曹軼梅,馬江濤,劉在新.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2008(01)
[10]口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC基因的克隆與原核表達[J]. 羅寶正,薄清如,王偉毅,程鋼,何蘊韶.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2005(02)

碩士論文
[1]口蹄疫病毒3B非結(jié)構(gòu)蛋白單克隆抗體的制備及應(yīng)用[D]. 李永亮.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009



本文編號：3058800