2011年,我國豬群中暴發(fā)一種以腹瀉等為主要癥狀的傳染病。為了研究“豬腹瀉病”中主要病毒性病原在國內(nèi)的流行情況,本研究對豬源哺乳動物呼腸孤病毒進行了分子流行病學調(diào)查；分析了MRV國內(nèi)流行株與國內(nèi)外其它毒株間的遺傳演化關(guān)系。在對病毒分離鑒定方法認識的基礎上,利用Vero細胞分離到一株豬源1型呼腸孤病毒；構(gòu)建了分離株的全長cDNA克隆。本研究為我國豬群中主要病毒病原的分子流行病學特征提供科學依據(jù),同時也豐富了豬源MRV流行病學研究資源。本研究具體內(nèi)容如下：1中國部分地區(qū)豬群中哺乳動物呼腸孤病毒分子流行病學調(diào)查為了研究中國豬群中哺乳動物呼腸孤病毒（Mammalian Reovirus, MRV）的分子流行病學,本試驗用巢式RT-PCR檢測2010年1月到2012年12月送檢的不同豬場病料,并對其中45份陽性病料的核酸進行濃縮后用根據(jù)S1基因設計的型特異性的引物進行RT-PCR,同時將擴增產(chǎn)物純化并克隆至T載體經(jīng)測序后進行進化分析。進化分析結(jié)果表明這些毒株分屬血清1、2、3型。3型毒株為優(yōu)勢流行毒株,流行范圍覆蓋大陸絕大部分地區(qū)。這些結(jié)果豐富了國內(nèi)MRV基因變異情況的數(shù)據(jù),將為新的診斷方法的建... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
第一章 呼腸孤病毒結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)生學研究進展
    1 呼腸孤病毒基因組和蛋白綜述
        1.1 基因組結(jié)構(gòu)
        1.2 內(nèi)衣殼結(jié)構(gòu)
        1.3 外衣殼
    2 呼腸孤病毒復制的概述
    3 病毒組裝的探討
    4 呼腸孤病毒基因組的組裝
    5 病毒包涵體的形態(tài)發(fā)生
    參考文獻
第二章 中國部分地區(qū)豬群中哺乳動物呼腸孤病毒分子流行病學調(diào)查
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 臨床樣品
        1.2 RNA提取,RT-套式PCR（RT-nPCR）
        1.3 S1基因的克隆與測序
        1.4 進化分析
    2 結(jié)果
        2.1 MRV病料的采集、檢測
        2.2 S1基因序列的同源性分析
        2.3 氨基酸序列分析
        2.4 進化分析
    3 討論
    參考文獻
    Abstract
第三章 一株豬源1型呼腸孤病毒的分離及鑒定
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 細胞及試劑
        1.2 引物設計
        1.3 病毒分離
        1.4 病毒的純化
        1.5 病毒形態(tài)學觀察
        1.6 病毒RNA提取、核酸電泳、基因的擴增及克隆與序列測定
        1.7 目的基因的序列分析
    2 結(jié)果
        2.1 病毒感染單層Vero細胞后的CPE
        2.2 病毒形態(tài)學觀察
        2.3 病毒全基因組的RNA凝膠電泳
        2.4 病毒S1基因基因同源性分析和核苷酸系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析
        2.5 病毒S2、S3、S4基因核苷酸系統(tǒng)發(fā)育進化分析
    3 討論
    參考文獻
    Abstract
第四章 呼腸孤病毒SHR-A株全長CDNA克隆的構(gòu)建及序列分析
    摘要
    1 材料
        1.1 毒株、菌株、細胞株等主要試劑
        1.2 主要試劑配制
        1.3 MRVs參考毒株全基因序列
        1.4 生物信息學軟件
    2 方法
        2.1 病毒增殖
        2.2 病毒濃縮
        2.3 病毒RNA的提取
        2.4 引物設計及合成
        2.5 反轉(zhuǎn)錄cDNA合成
        2.6 全基因RT-PCR擴增
        2.7 PCR產(chǎn)物的純化
        2.8 DNA片段與克隆載體的連接
        2.9 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.10 重組質(zhì)粒的抽提及測序
        2.11 病毒5'-RACE擴增
        2.12 病毒3'-RACE擴增
        2.13 全基因序列拼接
        2.14 SHR-A與呼腸孤病毒參考株同源性分析
        2.15 SHR-A分離株全基因核苦酸序列進化關(guān)系分析
    3 結(jié)果
        3.1 病毒基因RT-PCR擴增
        3.2 病毒5'-RACE與3'-RACE PCR擴增結(jié)果
        3.3 SHR-A各段基因與MRV參考株同源性分析
    4 討論
    參考文獻
    Abstract
第五章 呼腸孤病毒1型S1、S4基因在SF9昆蟲細胞中的表達
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 S1基因的PCR擴增
        2.2 重組供體質(zhì)粒pBAC-S1和pBAC-S4的酶切鑒定
        2.3 重組病毒rBS-S1和rBS-S4的獲得
        2.4 重組病毒PCR鑒定
        2.5 表達產(chǎn)物的IFA檢測
    3 討論
    參考文獻
    Abstract
全文總結(jié)
致謝
碩士期間論文發(fā)表情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]果子貍源呼腸孤病毒MPC/04株全基因組序列測定與分析[J]. 邵昱昊,韓宗璽,李慧昕,孔憲剛,劉勝旺.  中國預防獸醫(yī)學報. 2010(08)
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博士論文
[1]豬呼腸孤病毒SC-A株的分離鑒定及全基因組cDNA文庫的構(gòu)建和分子遺傳特征分析[D]. 曾智勇.四川農(nóng)業(yè)大學 2006



本文編號：3056226