人工授精的出現(xiàn)可以用來改善家畜繁殖以及打破一些傳統(tǒng)生產(chǎn)方式,是現(xiàn)代動物育種中應(yīng)用最廣泛的繁殖技術(shù),避免了疾病傳播及節(jié)約成本。公豬精液質(zhì)量對于人工授精的影響極大,可以直接影響母豬受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。因此,在體外妥善保管豬精液就尤為重要,可以影響精液質(zhì)量的因素有很多如:保存液、保存溫度以及pH值等。常溫液態(tài)保存是目前養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)上普遍應(yīng)用的方法。但在此溫度下,精子新陳代謝依然存在,生成活性氧,易發(fā)生頂體反應(yīng),產(chǎn)生獲能樣變化,導致體外精子活力降低,存活時間縮短。獲能的開始與鈣離子攝取有關(guān),鈣離子與鈣調(diào)蛋白結(jié)合激活Ca²⁺/CaM信號途徑,產(chǎn)生超激活反應(yīng)。Ca²⁺/CaM復合物調(diào)節(jié)多種酶的活性,導致蛋白質(zhì)磷酸化,尤其酪氨酸磷酸化,是獲能標志。鈣離子通過Ca²⁺/CaM信號傳導和cAMP/PKA信號傳導途徑共同調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化。本實驗為了抑制精子在常溫保存下體外獲能采取兩種方式,第一種:在保存液Modena中加入螯合劑EGTA對鈣離子進行螯合,阻礙細胞外鈣離子進入胞內(nèi)。第二種:在保存液中加入鈣調(diào)蛋白特異性的拮抗劑W7,嘗試通過與C... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 人工授精
    1.2 精液保存現(xiàn)狀
        1.2.1 液態(tài)保存
        1.2.2 冷凍保存
        1.2.3 常溫保存的問題
    1.3 常用液態(tài)保存液
    1.4 精子獲能
        1.4.1 體內(nèi)精子獲能
        1.4.2 體外保存發(fā)生獲能
    1.5 鈣離子在細胞中主要作用
        1.5.1 鈣離子與神經(jīng)信號轉(zhuǎn)導
        1.5.2 鈣離子與凝血
        1.5.3 鈣離子與生殖細胞
            1.5.3.1 鈣離子在精子獲能中的作用
            1.5.3.2 鈣離子在卵母細胞激活中的作用
    1.6 螯合劑在精液保存中作用
        1.6.1 金屬螯合劑
        1.6.2 EGTA與EDTA
    1.7 鈣調(diào)蛋白在精液保存中的影響
        1.7.1 鈣調(diào)蛋白與獲能
        1.7.2 鈣調(diào)蛋白拮抗劑
    1.8 ROS與精子獲能
    1.9 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗動物
    2.2 精液采集與稀釋
    2.3 主要試劑和溶液配制
    2.4 主要儀器
    2.5 精子質(zhì)量的檢測
        2.5.1 精子活力和運動參數(shù)檢測
        2.5.2 質(zhì)膜完整性檢測
        2.5.3 精子獲能狀態(tài)檢測
        2.5.4 頂體完整性檢測
        2.5.5 精子ROS含量檢測
    2.6 體外受精
    2.7 實驗設(shè)計
        2.7.1 常溫保存中加入EGTA
        2.7.2常溫保存中加入拮抗劑W7
        2.7.3 加入EGTA及W7對精子ROS含量的影響
        2.7.4 受精能力的檢測
    2.8 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 EGTA對豬精液液態(tài)保存的影響
        3.1.1 EGTA對保存精子活力和運動參數(shù)的影響
        3.1.2 EGTA對保存精子質(zhì)膜完整性的影響
        3.1.3 EGTA對保存精子獲能的影響
        3.1.4 EGTA對精子頂體完整率的影響
    3.2 W7對精子保存的影響
        3.2.1 W7對保存精子活力和運動參數(shù)的影響
        3.2.2 W7對保存精子質(zhì)膜完整性的影響
        3.2.3 W7對保存精子獲能的影響
        3.2.4 W7對精子頂體完整率的影響
    3.3 EGTA和W7對液態(tài)保存的豬精子ROS含量的影響
    3.4 EGTA和W7對保存的豬精子受精及后續(xù)發(fā)育能力的影響
        3.4.1 添加EGTA對精子受精的影響
        3.4.2 添加W7對精子受精的影響
4 討論
    4.1 常溫保存中添加EGTA可以提高精子保存質(zhì)量
    4.2 常溫保存中添加W7可以提高精子保存質(zhì)量
    4.3 EGTA和W7對精子受精能力的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文


【參考文獻】：
碩士論文
[1]鈣離子誘導的鈣調(diào)蛋白動力學及熱動力學研究[D]. 武光榮.復旦大學 2012



本文編號：3054082