為了研究豬附紅細(xì)胞體eno基因重組蛋白的免疫效果,本試驗(yàn)將豬附紅細(xì)胞體eno基因與pET-15b載體進(jìn)行連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞。對(duì)表達(dá)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)、純化,利用純化后的豬附紅細(xì)胞體eno重組蛋白（命名為rMseno）對(duì)小鼠進(jìn)行免疫,從而評(píng)價(jià)該重組蛋白在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答水平。試驗(yàn)將20只4周齡的雄性昆明小鼠隨機(jī)分為A、B、C、D 4個(gè)組。免疫A組接種純化后的重組蛋白rMseno;免疫B組接種經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后的重組菌E.coli-Mseno;對(duì)照C組接種等量PBS;對(duì)照D組接種未經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)的重組菌E.coli-Mseno。通過(guò)ELISA檢測(cè)方法分別測(cè)定血清中抗豬附紅細(xì)胞體特異抗體水平及γ干擾素（IFN-γ）和白細(xì)胞介素4（IL-4）細(xì)胞因子水平,最后通過(guò)脾臟淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)來(lái)反映小鼠體內(nèi)T淋巴細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果顯示,構(gòu)建的重組pET-15b-eno質(zhì)粒目的基因片段大小為1 632 bp,與預(yù)期大小相同;純化的重組蛋白rMseno大小為61 ku,并能夠被鼠抗豬附紅細(xì)胞體血清所識(shí)別;免疫A組和免疫B組小鼠血清中抗豬附紅細(xì)胞體特異抗體水平,IFN-γ、IL-4細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pET-15b-eno的PCR及雙酶切鑒定結(jié)果

不同免疫組小鼠血清IFN-γ的水平

收集不同濃度咪唑過(guò)柱后的洗脫液,將各組分進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測(cè)。結(jié)果如圖3所示,用含20和50 mmol/L咪唑的洗脫液能充分的將雜蛋白洗掉,得到較好的純化效果。圖2 重組質(zhì)粒pET-15b-eno的PCR及雙酶切鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羊IL-2和OrfV-F1L基因疫苗聯(lián)合免疫小鼠的免疫應(yīng)答研究[J]. 李婷,包細(xì)明,鮮思美,張益,饒?bào)w宇,吳伯梅,張友,劉嬡,李鵬飛,閔德省.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(07)
[2]不同刺激劑對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞亞群增殖的影響[J]. 楊學(xué)琴,陳鈺婷,李麗梅,高朝賢,劉征宇,惠長(zhǎng)野,張文.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2018(06)
[3]木犀草素對(duì)小鼠T淋巴細(xì)胞體外增殖及凋亡的作用[J]. 趙長(zhǎng)祺,趙耀紅,于海龍.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2018(22)
[4]豬附紅細(xì)胞體小鼠感染模型建立條件的優(yōu)化[J]. 倪婷婷,伍生軍,梁晚?xiàng)?許應(yīng)天,吳金桐,薛書江.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2017(09)
[5]豬附紅細(xì)胞體分子檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 鄒亞文,賈杏林,黃琳.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(05)
[6]豬附紅細(xì)胞體基因與蛋白研究進(jìn)展[J]. 李松月,劉明明,賈立軍.  延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào). 2015(02)
[7]豬附紅細(xì)胞體α-烯醇化酶基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 薛書江,張守發(fā),李海峰,張影,錢年超,劉明明,李積旭.  畜牧與獸醫(yī). 2014(05)
[8]豬附紅細(xì)胞體分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 唐麗,李曉云,賈杏林.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(07)
[9]豬附紅細(xì)胞體感染BALB/c小鼠試驗(yàn)研究[J]. 楊朋艷,梁晚?xiàng)?張守發(fā),賈立軍.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2012(23)
[10]豬附紅細(xì)胞體感染BALB/c小鼠模型的建立及相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)[J]. 馮會(huì)權(quán),徐昆,宋立先,田晶,賀寶軍,巴彩鳳.  畜牧與獸醫(yī). 2011(01)

碩士論文
[1]豬支原體肺炎滅活疫苗水性及水包油型佐劑研制及初步免疫效果評(píng)價(jià)[D]. 解海東.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]豬支原體肺炎滅活疫苗及活疫苗佐劑研究[D]. 董璐.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]豬附紅細(xì)胞體小鼠感染模型的建立及血液學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)[D]. 余飛.上海交通大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3052522