哺乳動物精子發(fā)生是由很多基因調控的級聯(lián)反應過程。精子發(fā)生過程是否順利進行直接關系到精液品質的好壞,對雄性動物的繁殖性能具有重要的影響。研究報道Dmrt1、Dmrt7、Boule和Dazl基因與雄性動物睪丸功能維持以及精子發(fā)生過程密切相關,但研究主要聚焦在人和模式動物小鼠上,并且在不同物種中其發(fā)揮的調控作用并不完全相同。目前在重要經(jīng)濟物種綿羊上的研究仍處于空白階段。因而探究Dmrt1、Dmrt7、Boule和Dazl基因在綿羊睪丸發(fā)育中的調控作用,對闡明種公羊精子發(fā)生的分子調控機制具有重要意義。本研究以出生后0月齡（初生）、2月齡（斷奶）、5⁶月齡（初情期）、12月齡（性成熟后）和24月齡（成年）5個較為關鍵發(fā)育期的綿羊睪丸組織以及12月齡綿羊的肝臟、腎臟、心臟、肺臟、脾臟和肌肉組織作為試驗材料。在采用qRT-PCR和Western blot方法從轉錄和翻譯水平對Dmrt1、Dmrt7、Boule和Dazl基因在不同發(fā)育期睪丸組織中的表達規(guī)律進行檢測的基礎上,利用qRT-PCR對12月齡綿羊各組織中Dmrt1、Boule和Dazl mRNA表達量進行測定,并運用免疫... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞中英文對照表
摘要
Summary
第一章 文獻綜述
    1 精子發(fā)生概述
    2 精子發(fā)生相關基因研究進展
        2.1 Dmrt1基因
        2.2 Dmrt7基因
        2.3 Boule基因
        2.4 Dazl基因
    3 研究的目的與意義
第二章 試驗研究
    試驗一 Dmrt1和Dmrt7在綿羊睪丸中的表達與定位分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗動物
            1.2 主要試劑和耗材
            1.3 主要儀器
            1.3 試驗方法
                1.3.1 組織材料收集
                1.3.2 組織總RNA提取
                1.3.3 第一鏈cDNA合成
                1.3.4 總蛋白提取與變性
                1.3.5 引物設計與合成
                1.3.6 qRT-PCR
                1.3.7 Westernblot
                1.3.8 睪丸組織石蠟切片的制備
                1.3.9 HE染色
                1.3.10 免疫組織化學染色
                1.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與結果分析
        2 結果與分析
            2.1 綿羊各組織中Dmrt1mRNA的表達
            2.2 綿羊睪丸中Dmrt7mRNA的表達
            2.3 綿羊睪丸組織中Dmrt1蛋白的表達
            2.4 綿羊睪丸組織中Dmrt7蛋白的表達
            2.5 不同月齡綿羊睪丸組織HE染色
            2.6 綿羊睪丸組織中Dmrt1蛋白的免疫組化染色
            2.7 綿羊睪丸組織中Dmrt7蛋白的免疫組化染色
        3 討論
            3.1 Dmrt1基因在綿羊各組織中的表達特點
            3.2 不同發(fā)育期綿羊睪丸組織形態(tài)學特點
            3.3 Dmrt1蛋白在不同發(fā)育期綿羊睪丸組織中的分布特點
            3.4 Dmrt7基因在綿羊不同發(fā)育期睪丸組織中的表達與分布特點
    試驗二 Boule和Dazl在綿羊睪丸中的表達與定位分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗動物
            1.2 主要試劑和耗材
            1.3 試驗方法
                1.3.1 組織材料收集
                1.3.2 組織總RNA提取
                1.3.3 第一鏈cDNA合成
                1.3.4 總蛋白提取與變性
                1.3.5 引物設計與合成
                1.3.6 qRT-PCR
                1.3.7 Westernblot
                1.3.8 睪丸組織石蠟切片的制備
                1.3.9 免疫組織化學染色
                1.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與結果分析
        2 結果與分析
            2.1 綿羊各組織中BoulemRNA的表達
            2.2 綿羊各組織中DazlmRNA的表達
            2.3 綿羊睪丸組織中Boule蛋白的表達
            2.4 綿羊睪丸組織中Dazl蛋白的表達
            2.5 綿羊睪丸組織中Boule蛋白的免疫組化染色
            2.6 綿羊睪丸組織中Dazl蛋白的免疫組化染色
        3 討論
            3.1 Boule基因在綿羊不同發(fā)育期睪丸組織中的表達規(guī)律
            3.2 Boule基因在12月齡綿羊各組織中的表達規(guī)律
            3.3 Boule蛋白在不同發(fā)育期綿羊睪丸組織中的分布特點
            3.4 Dazl基因在綿羊各組織中的表達規(guī)律
            3.5 Dazl蛋白在不同發(fā)育期綿羊睪丸組織中的分布特點
第三章 結論
本研究的創(chuàng)新點
本研究的不足之處
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介
導師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]粵黃雞PGCs無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立[J]. 張曉芳,趙姝燦,張豫,鄭桂純,李京華,王丙云,陳志勝.  農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2017(08)
[2]SOX9基因調控雄性哺乳動物生殖活動的研究進展[J]. 李討討,馬友記,趙興緒.  畜牧獸醫(yī)學報. 2017(06)
[3]非編碼RNA對哺乳動物精子發(fā)生過程的調控[J]. 陳瑞,于帥,陳曉旭,杜健,朱振東,潘傳英,曾文先.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2017(02)
[4]SOX9基因在綿羊不同組織中的表達及其在睪丸中的定位[J]. 李討討,馬友記,盧曾奎,雒瑞瑞,高建鋒,趙興緒.  農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2016(10)
[5]唯支持細胞綜合征患者睪丸組織Boule基因5’調控序列甲基化分析[J]. 李紅星,景原雪,孫亮,王乃輝,宋德瀟,靳怡,王樂瑋,薛石龍.  中華男科學雜志. 2016(06)
[6]不同月齡高原型藏綿羊睪丸組織中蛋白基因產(chǎn)物9.5和神經(jīng)肽Y的分布比較[J]. 袁莉剛,曲亞玲,魯玉榮,李聰.  畜牧獸醫(yī)學報. 2016(01)
[7]Rspo1在雌性脊椎動物性別分化中的功能[J]. 方夢蝶,張衍梅,王孝舉.  中國生物化學與分子生物學報. 2015(08)
[8]牦牛犢牛睪丸結構特征及細胞外基質相關蛋白的分布[J]. 袁莉剛,曲亞玲,朱俊峰,谷來鳳,田旦增.  解剖學報. 2015(01)
[9]Dmrt1與哺乳動物生殖細胞發(fā)育[J]. 魏于棟,申單,程慧玲,李娜,華進聯(lián).  中國細胞生物學學報. 2015(02)
[10]Boule基因在小鼠精子發(fā)生過程中的動態(tài)表達[J]. 晏媛,張辰望,朱夢怡,徐宇君.  南京醫(yī)科大學學報(自然科學版). 2015(01)

博士論文
[1]DNA甲基化參與調控Dazl生殖特異表達及其與男性生精障礙和腫瘤的相關性研究[D]. 薛鵬.南京醫(yī)科大學 2015
[2]LRGUK在小鼠精子發(fā)生過程的功能研究[D]. 劉艷.鄭州大學 2015

碩士論文
[1]不同發(fā)育期綿羊睪丸差異蛋白質組學研究[D]. 盧曾奎.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2016
[2]DAZL和BOULE基因促進小鼠早期生殖分化的研究[D]. 解名名.安徽大學 2015
[3]牦牛生精小管形態(tài)發(fā)育特征及細胞外基質相關蛋白分布[D]. 朱俊峰.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2013
[4]Dmrt7低表達水平與犏牛精子發(fā)生阻滯相關性研究[D]. 金帥.蘭州大學 2013
[5]牦牛Boule基因選擇性剪接體及其DNA甲基化修飾分析與犏牛雄性不育的關系[D]. 徐洪濤.南京農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3049699