兔出血癥病毒（Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV）是一種可以引起成年兔急性死亡的烈性、傳染性病原體,隸屬于嵌杯病毒科兔病毒屬。病毒感染成年兔30h即出現(xiàn)顯著臨床癥狀,48-72h90%的兔死亡,然而小于45日齡的幼年兔對該病毒不敏感,無臨床癥狀。這種病毒敏感性的差異,可能與發(fā)育過程中功能蛋白表達的差異相關(guān)。肝臟作為病毒增殖的場所,卻不表達病毒的吸附因子組織血型抗原（HBGA）,因此篩選成年兔和幼年兔肝臟組織的差異蛋白質(zhì),并研究其與RHDV的相關(guān)性對于闡明RHDV的致病機制具有重要意義。本實驗利用雙向熒光差異凝膠電泳（2-D DIGE）技術(shù)分離成年兔和幼年兔肝臟組織差異蛋白質(zhì),并用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜（MS）技術(shù)鑒定差異蛋白質(zhì),獲得了46個具有統(tǒng)計學(xué)意義的差異表達蛋白點（ratio>1.5,P<0.05）,其中28個在成年兔肝臟組織中表達上調(diào),18個表達下調(diào)；并采用生物信息學(xué)對差異蛋白質(zhì)進行Gene Ontology功能富集分析和蛋白質(zhì)的互作分析。此外,采用熒光定量PCR技術(shù)對隨機挑選的3個差異蛋白：脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

酵母雙雜交原理圖

為了比較成年兔和幼年兔肝臟組織的蛋白質(zhì)組差異，采用2-D DIGE對成兔組和幼兔組的肝臟組織樣品進行差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，獲得了 3種焚光染料標(biāo)記的單獨圖像（圖2.1 A)及重疊圖像（圖2.1 B),經(jīng)DeCyder 2D 6.5軟件分析，差異表達在1.5倍以上且p<0.05的蛋白點共有58個（圖2.1C)。圖2.1給出的代表性圖像。WKKMUBKMWBttM3 lEF 10 3 lEF 10Bwmmmmm c ,4 -^B,鳴wHHBBW L 廣?一.‘r:'yA注：A: Cy2標(biāo)記的內(nèi)參，Cy3標(biāo)記成兔組，Cy5標(biāo)記幼兔組；B: 3種染料標(biāo)記的重疊圖像；C:紅色圈內(nèi)的為差異蛋白點的位置，黃色框內(nèi)的為差異蛋白點的編號圖2.1成年兔和幼年兔肝臟組織差異表達蛋白的雙向焚光差異凝膠電泳圖譜Fig 2.1 differentially expressed protein spots as indicated in two-dimensional fluorescenceelectrophoresis image of liver tissues in adult and young rabbits12

紅色星標(biāo)為差異蛋白質(zhì)參與通路的位置，其中BiP代表HSPA5，BRp57代表PDIA3，(? 2m代表B2M圖2.6 B2M、PDIA3和HSPA5參與的抗原加工與遞呈通路Fig 2.6 Antigen process and presentation pathway of B2M, PDIA3and HSPA517

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3049196