牛乳頭狀瘤是由牛乳頭瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）所引起的一種牛體表或部分黏膜發(fā)生慢性增生性腫瘤病，世界各地均有該病的發(fā)生，因損害皮革質(zhì)量和降低動(dòng)物體質(zhì)而給養(yǎng)牛業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。根據(jù)BPV L1蛋白基因序列，至今已被鑒定的BPV基因型有13種，還有很多未分類的假定基因型。目前，尚無(wú)有效疫苗來(lái)預(yù)防牛乳頭瘤病的發(fā)生。新疆是中國(guó)五大牧區(qū)之一，奶牛存欄數(shù)達(dá)280萬(wàn)頭左右，疑似BPV感染的病例在規(guī)模化奶牛場(chǎng)中時(shí)常發(fā)生，然而至今尚無(wú)關(guān)于奶牛感染BPV基因分型及其疫苗的研究報(bào)道，因此開(kāi)展新疆地區(qū)牛感染BPV的基因分型及BPV疫苗研究具有十分重要的意義。為了弄清新疆北疆地區(qū)牛感染BPV的基因型，本研究對(duì)新疆北疆地區(qū)牛乳頭狀瘤疑似病料進(jìn)行了病理組織學(xué)檢查和PCR檢測(cè)，并對(duì)新疆北疆BPV流行株進(jìn)行了基因分型。對(duì)BPV新疆流行株全基因組進(jìn)行克隆。將BPV2衣殼蛋白L1基因克隆入原核表達(dá)載體pGEX4T-1以及真核表達(dá)載體pcDNA3.1（+）中，分別在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)以及BHK-21細(xì)胞中誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)原核表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行Western blot鑒定，對(duì)真核表達(dá)的重組蛋白進(jìn)... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BPV基因組結(jié)構(gòu)

新疆北疆地區(qū)牛乳頭瘤病毒流行株基因分型及其衣殼蛋白表達(dá)研究利用 DNAMAN 軟件找出簡(jiǎn)并引物 FAP59/FAP64 在 BPV1-13 中所對(duì)應(yīng)的核苷酸片段。本研究將檢測(cè)出的這株假定新型乳頭瘤病毒的部分序列提交到 GenBank(KF751804)命名為 BPV/CHI-SW1。遺傳進(jìn)化樹(shù)分析采用 NJ 法（Neighbor-JoiningMethod）（Thompson and Neel, 1997），將 BPV/CHI-SW1 與 BPV1 至 BPV13 及16 種假定新型乳頭瘤病毒 L1 基因序列進(jìn)行比對(duì)分析并利用 MEGA 5 軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，bootstrap 重復(fù)次數(shù)為 1000。2 結(jié)果2.1 奶牛乳頭狀瘤臨床癥狀觀察患病牛顯示牛乳頭狀腫瘤在口吻、眼、頸部、肩部、后背、后蹄、乳頭均有發(fā)生，嚴(yán)重病例在面部、頸部、肩部均見(jiàn)到大面積乳頭狀瘤，腫瘤 0.5 cm至 7 cm直徑大小不等，有的連成一片，瘤體多呈結(jié)節(jié)狀及菜花狀，顏色多呈白色或灰褐色（圖 1-1）。大部分后備牛感染并出現(xiàn)乳頭狀腫瘤癥狀，個(gè)別牛癥狀明顯。AB C

2.3 PCR 檢測(cè)結(jié)果及序列分析56 份牛乳頭狀瘤疑似病料中，使用 FAP59/FAP64 引物，經(jīng) 2.0％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，所擴(kuò)增的目的 PCR 產(chǎn)物的大小分別約為 450 bp（圖 1-3）。C D圖 1-2 組織病理學(xué)觀察（HE 染色 100x）Fig. 1-2 Histopathological examination of papillomas（100x）A 表皮角質(zhì)層增生和棘層細(xì)胞肥厚。B 挖空細(xì)胞（黑色箭頭指示）。A, illustrate epidermal hyperplasia with marked acanthosis in the stratum corneum andstratum spinosum are seen. B, koilocytes are indicated by black arrows.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3048277