豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒2型以及豬偽狂犬病病毒在臨床診斷過(guò)程中因具有比較相似的臨床癥狀而較難確診,同時(shí)金黃色葡萄球菌、鏈球菌、沙門菌、大腸埃希菌四種致病菌時(shí)刻危脅著動(dòng)物健康和公共衛(wèi)生安全,而且其在病毒感染中常常繼發(fā)感染,四種病毒和四種細(xì)菌中2³種混合感染的病例較為常見,因此建立一種特異、靈敏、快速及量化的檢測(cè)方法,用于臨床診斷和檢測(cè)疾病,同時(shí)為疾病的防控和凈化提供幫助都是有必要的。本研究通過(guò)對(duì)以上四種病毒和四種細(xì)菌的NCBI中登錄的相應(yīng)基因保守序列設(shè)計(jì)特異性的引物與TaqMan探針,建立一種可以檢測(cè)以上四種病毒和四種細(xì)菌的TaqMan多重?zé)晒舛縋CR方法,并初步應(yīng)用于臨床實(shí)踐。本研究為豬群常見疾病的診斷和實(shí)驗(yàn)室研究提供一種良好的熒光定量PCR方法,為疾病的防控與凈化提供了一定的技術(shù)基礎(chǔ)。本研究取得如下結(jié)果:1.通過(guò)對(duì)豬瘟病毒的E2基因、豬繁殖與呼吸綜合征病毒的ORF7基因、豬圓環(huán)病毒2型的ORF1基因和豬偽狂犬病病毒的gE基因分別設(shè)計(jì)四對(duì)特異性引物和四條探針,建立能夠同時(shí)檢測(cè)四種病毒的多重TaqMan熒光定量PCR方法,并對(duì)其特異性、靈敏性及... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬常見四種病毒和四種細(xì)菌及熒光定量PCR方法的研究概況
        1.1 豬常見四種病毒的研究概況
            1.1.1 豬瘟病毒
            1.1.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒
            1.1.3 豬圓環(huán)病毒2型
            1.1.4 豬偽狂犬病病毒
        1.2 豬常見四種細(xì)菌的研究概況
            1.2.1 金黃色葡萄球菌
            1.2.2 鏈球菌
            1.2.3 沙門菌
            1.2.4 大腸埃希菌
        1.3 病毒檢測(cè)方法的研究概況
            1.3.1 病毒的分離
            1.3.2 血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)
            1.3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
        1.4 細(xì)菌檢測(cè)方法的研究概況
            1.4.1 細(xì)菌的分離鑒定
            1.4.2 血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)
            1.4.3 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
        1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)的研究概況
            1.5.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的原理
            1.5.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的分類
            1.5.3 本試驗(yàn)涉及病毒和細(xì)菌的熒光定量PCR方法的研究
        1.6 本研究的目的和意義
試驗(yàn)研究
    第二章 豬常見四種病毒TaqMan多重?zé)晒舛縋CR方法的建立及初步應(yīng)用
        2.1 材料
            2.1.1 毒株,細(xì)胞株和菌株
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要設(shè)備儀器
            2.1.4 臨床樣本
        2.2 方法
            2.2.1 引物和探針的設(shè)計(jì)
            2.2.2 病毒RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
            2.2.3 病毒DNA的提取
            2.2.4 目的基因的擴(kuò)增
            2.2.5 PCR產(chǎn)物回收純化
            2.2.6 目的片段的克隆及標(biāo)準(zhǔn)模板制備
            2.2.7 TaqMan熒光定量PCR擴(kuò)增
            2.2.8 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
            2.2.9 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
            2.2.10 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性試驗(yàn)
            2.2.11 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR靈敏性試驗(yàn)
            2.2.12 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR重復(fù)性試驗(yàn)
            2.2.13 臨床樣本的檢測(cè)
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 陽(yáng)性質(zhì)粒鑒定結(jié)果
            2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)模板的制備
            2.3.3 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
            2.3.4 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
            2.3.5 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性試驗(yàn)
            2.3.6 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR靈敏性試驗(yàn)
            2.3.7 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR重復(fù)性試驗(yàn)
            2.3.8 臨床樣品的檢測(cè)
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 豬常見四種細(xì)菌TaqMan多重?zé)晒舛縋CR方法的建立及初步應(yīng)用
        3.1 材料
            3.1.1 菌株和細(xì)胞株
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要設(shè)備儀器
            3.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2 方法
            3.2.1 引物和探針的設(shè)計(jì)
            3.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)及DNA的提取
            3.2.3 目的基因的擴(kuò)增
            3.2.4 PCR產(chǎn)物回收純化
            3.2.5 目的片段的克隆及標(biāo)準(zhǔn)模板制備
            3.2.6 TaqMan熒光定量PCR擴(kuò)增
            3.2.7 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
            3.2.8 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
            3.2.9 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性試驗(yàn)
            3.2.10 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR靈敏性試驗(yàn)
            3.2.11 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR重復(fù)性試驗(yàn)
            3.2.12 細(xì)菌人工模擬病料的檢測(cè)
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 陽(yáng)性質(zhì)粒鑒定結(jié)果
            3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)模板的制備
            3.3.3 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
            3.3.4 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
            3.3.5 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR特異性試驗(yàn)
            3.3.6 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR靈敏性試驗(yàn)
            3.3.7 TaqMan多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR重復(fù)性試驗(yàn)
            3.3.8 細(xì)菌人工模擬病料的檢測(cè)
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬鏈球菌熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 雷宇平,王仲兵,楊治平,張仲萍,王治維,胡明明.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2017(12)
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[5]豬瘟國(guó)內(nèi)外流行新趨勢(shì)[J]. 夏銘崎.  今日養(yǎng)豬業(yè). 2017(03)
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[7]豬藍(lán)耳病的研究進(jìn)展[J]. 陳澤芳,趙愛(ài)莉.  畜禽業(yè). 2017(03)
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[10]我國(guó)生豬生產(chǎn)現(xiàn)狀及發(fā)展思路[J]. 左玲玲.  北方牧業(yè). 2016(20)

博士論文
[1]以磁珠為載體的電化學(xué)免疫傳感器[D]. 李芳.華中科技大學(xué) 2012

碩士論文
[1]臨床分離的37株致病性葡萄球菌的鑒定與研究[D]. 朱彤緋.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]多重PCR檢測(cè)肉及肉制品中四種食源性致病菌的研究[D]. 楊國(guó)興.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3048223