褪黑素（Melatonin,MT）是一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素和高效抗氧化劑,能夠通過受體信號途徑參與動物的免疫和生殖活動調(diào)節(jié)。本研究構(gòu)建了乳腺褪黑素合成酶轉(zhuǎn)基因羊乳腺反應(yīng)器,并探索了局部褪黑素信號參與炎癥反應(yīng)、排卵和胚胎附植過程的作用機(jī)制。本研究成功建立了過表達(dá)褪黑素合成酶基因芳香胺N-乙�；D(zhuǎn)移酶（Arylalkylamine N-acetyltransferase,AANAT）和羥基吲哚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（Hydroxyindole-o-methyl transferase,HIOMT）的轉(zhuǎn)基因綿羊群體,證明褪黑素合成酶基因AANAT和HIOMT可以在羊乳腺上皮細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),并研究了過表達(dá)褪黑素對綿羊抗炎癥能力和繁殖效率的影響。以白薩�？撕投挪淳d羊?yàn)椴牧?通過CRISPR/Cas9結(jié)合顯微注射,將特異表達(dá)載體pBC1-AANAT和pBC1-HIOMT線性化片段與Cas9 mRNA、sgRNA 一起注射到原核期胚胎內(nèi),實(shí)現(xiàn)與胚胎基因組整合,最終構(gòu)建乳腺特異表達(dá)褪黑素合成酶轉(zhuǎn)基因綿羊新品系。分別對166只杜泊綿羊和139只白薩福克綿羊供體進(jìn)行超排,撤栓后50-55h定時進(jìn)行內(nèi)窺鏡輸精,10-... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

哺乳動物Mf的合成與釋放(Tanetal 2012.)

制腺苷酸環(huán)化酶ＡＣ的活性以降低ｃＡＭＰ的水平，起到抑制ｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ／ＥＲＫ信號通路的??作用，通過抑制ＰＫＡ激活離子通道增加Ｋ＋外流和Ｃａ２＋的內(nèi)流。另一方面，此外ＭＴ／ＭＴ１信號還??能通過與Ｇｉ結(jié)合激活磷脂酶Ｃ?（ＰＬＣ）通路，通過三磷酸肌醇途徑提高細(xì)胞內(nèi)Ｃａ２＋水平（圖１－??２）。??以ｉｖ?＾??｛＾ＰＫＡ——?ＫＵｆ＾ｌｏｒＲｊＩ＾Ｂ??／＾＼＼?°?＾＾（＋）??／?（?＼?１?ＭＥＫ１／２?ＥＲＫ?１／２??＊ｃｒｆ＋?ＣＲＥＢ?暑?Ｐ－ＣＲＥＢ??圖１－２．褪黑素ＭＴ１受體的信號通路（Ｄｕｂｏｃｏｖｉｃｈ，?２０１２）??Ｆｉｇ．?１?－２?Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?ｍｅｌａｔｏｎｉｎ?ＭＴ１?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ??ＭＴ２與ＭＴｌ受體在氨基酸序列上具有６０％的同源性，其與Ｇｉ結(jié)合同樣可以導(dǎo)致ｃＡＭＰ合??成減少（Ｒｅｐｐｅｒｔ?ｅｔ?ａｌ．，１９９５），從而抑制ＰＫＡ途徑以及降低了?ＣＲＥＢ的磷酸化水平。另外，激活??ＭＴ２型受體還可以降低鳥苷酸環(huán)化酶ＧＣ的活性和ｃＧＭＰ水平。通過特異性結(jié)合Ｇｂｇ和Ｇａｑ，ＭＴ２??能激活ＰＬＣ信號，使得ＩＰ３動員細(xì)胞內(nèi)Ｃａ２＋釋放到細(xì)胞質(zhì)中，與ＤＡＧ協(xié)同激活蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎ??ｋｉｎａｓｅＣ，?ＰＫＣ）途徑弓Ｉ起級聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)行下游的細(xì)胞應(yīng)答（Ｄｕｂｏｃｏｖｉｃｈｅｔａｌ＿，２０１０；圖１－３）。??ＭＬＴ????？—????（＾？ｐｉｐ

制腺苷酸環(huán)化酶ＡＣ的活性以降低ｃＡＭＰ的水平，起到抑制ｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ／ＥＲＫ信號通路的??作用，通過抑制ＰＫＡ激活離子通道增加Ｋ＋外流和Ｃａ２＋的內(nèi)流。另一方面，此外ＭＴ／ＭＴ１信號還??能通過與Ｇｉ結(jié)合激活磷脂酶Ｃ?（ＰＬＣ）通路，通過三磷酸肌醇途徑提高細(xì)胞內(nèi)Ｃａ２＋水平（圖１－??２）。??以ｉｖ?＾??｛＾ＰＫＡ——?ＫＵｆ＾ｌｏｒＲｊＩ＾Ｂ??／＾＼＼?°?＾＾（＋）??／?（?＼?１?ＭＥＫ１／２?ＥＲＫ?１／２??＊ｃｒｆ＋?ＣＲＥＢ?暑?Ｐ－ＣＲＥＢ??圖１－２．褪黑素ＭＴ１受體的信號通路（Ｄｕｂｏｃｏｖｉｃｈ，?２０１２）??Ｆｉｇ．?１?－２?Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?ｍｅｌａｔｏｎｉｎ?ＭＴ１?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ??ＭＴ２與ＭＴｌ受體在氨基酸序列上具有６０％的同源性，其與Ｇｉ結(jié)合同樣可以導(dǎo)致ｃＡＭＰ合??成減少（Ｒｅｐｐｅｒｔ?ｅｔ?ａｌ．，１９９５），從而抑制ＰＫＡ途徑以及降低了?ＣＲＥＢ的磷酸化水平。另外，激活??ＭＴ２型受體還可以降低鳥苷酸環(huán)化酶ＧＣ的活性和ｃＧＭＰ水平。通過特異性結(jié)合Ｇｂｇ和Ｇａｑ，ＭＴ２??能激活ＰＬＣ信號，使得ＩＰ３動員細(xì)胞內(nèi)Ｃａ２＋釋放到細(xì)胞質(zhì)中，與ＤＡＧ協(xié)同激活蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎ??ｋｉｎａｓｅＣ，?ＰＫＣ）途徑弓Ｉ起級聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)行下游的細(xì)胞應(yīng)答（Ｄｕｂｏｃｏｖｉｃｈｅｔａｌ＿，２０１０；圖１－３）。??ＭＬＴ????？—????（＾？ｐｉｐ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]褪黑素對雌性動物繁殖影響的研究進(jìn)展[J]. 張珍珍,何長久,劉國世.  中國畜牧雜志. 2017(06)
[2]利用腹腔內(nèi)窺鏡方法比較不同輸精時間對羊體內(nèi)胚胎生產(chǎn)效率的影響[J]. 艾合麥提·吐爾遜,楊明輝,宋玉坤,徐志遠(yuǎn),姬鵬云,賈功雪,張金龍,張效生,朱士恩,劉國世.  黑龍江動物繁殖. 2016(02)
[3]黑薩福克和杜泊綿羊超數(shù)排卵效率比較及分析[J]. 易金云,李繼成,任超,董德權(quán),劉國世,呂文發(fā).  草食家畜. 2015(03)
[4]Effects of Cigarette Smoking and Smoking Cessation on Plasma Constituents and Enzyme Activities Related to Oxidative Stress[J]. ZHOUJUNFU,YANXIAOFENG,GUOFANGZHEN,SUNNINGYA,QIANZHIJUN,DINGDEYUN.  Biomedical and Environmental Sciences. 2000(01)

博士論文
[1]褪黑素和CNP對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響及過表達(dá)AANAT的研究[D]. 田秀芝.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]褪黑素降低牛奶體細(xì)胞數(shù)和提高奶牛繁殖性能的研究與應(yīng)用[D]. 史建民.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]白藜蘆醇和褪黑素對卵母細(xì)胞成熟及胚胎發(fā)育的作用機(jī)制[D]. 汪鋒.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]嶗山奶山羊乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染褪黑素合成酶基因的研究[D]. 宋怡樂.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3048107