豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一種豬的急性并高度接觸性傳染病,PEDV感染后可導(dǎo)致水樣腹瀉、嘔吐、脫水等癥狀,成年豬很少表現(xiàn)出臨床癥狀。從1976年開始我國就陸續(xù)有PED的報(bào)道,自2010年下半年以來,該病的流行強(qiáng)度和流行區(qū)域在不斷的加強(qiáng)和擴(kuò)大,對哺乳仔豬致死率較高,臨床上與豬傳染性胃腸炎、輪狀病毒和大腸桿菌等疫病較難鑒別診斷,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。本研究將純化的豬流行性腹瀉病毒和N蛋白作為包被抗原,建立了間接ELISA方法,用于PEDV抗體的檢測和血清學(xué)調(diào)查。此外,利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)獲得重組蛋白Nsp2,將純化的Nsp2蛋白免疫小鼠,利用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備Nsp2蛋白的單克隆抗體,為PEDV診斷和致病機(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)。具體內(nèi)容如下：1.PEDV全病毒抗原間接ELISA檢測方法的建立與初步應(yīng)用采用差速離心方法獲得純化PEDV,作為包被抗原,建立間接ELISA抗體檢測方法,對各項(xiàng)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,并確定其臨界值,同時(shí)進(jìn)行特異性... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬流行性腹瀉病毒的研究進(jìn)展
        1 病毒基本特性
            1.1 病毒理化與培養(yǎng)特性
        2 流行情況
        3 病毒基因組結(jié)構(gòu)與蛋白功能
            3.1 病毒基因組結(jié)構(gòu)
            3.2 病毒蛋白功能
        4 診斷技術(shù)
            4.1 臨床診斷及病理組織變化
            4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷方法
        5 免疫與預(yù)防
            5.1 PEDV滅活疫苗
            5.2 PEDV弱毒疫苗
        6 控制方法
            6.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理
            6.2 返飼治療
            6.3 疫苗注射治療
        參考文獻(xiàn)
第二篇 研究內(nèi)容
    第二章 豬流行性腹瀉病毒全病毒抗原間接ELISA抗體檢測方法的建立與初步應(yīng)用
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 間接ELISA方法的建立及條件優(yōu)化結(jié)果
            2.2 間接ELISA陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)的建立
            2.3 特異性試驗(yàn)
            2.4 敏感性試驗(yàn)
            2.5 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.6 符合率分析
            2.7 臨床血清樣品的檢測
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第三章 豬流行性腹瀉病毒N蛋白間接ELISA抗體檢測方法的建立與初步應(yīng)用
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 N基因的擴(kuò)增
            2.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定
            2.3 重組N蛋白SDS-PAGE結(jié)果
            2.4 表達(dá)產(chǎn)物Western-blotting鑒定結(jié)果
            2.5 重組N蛋白可溶性檢測
            2.6 重組N蛋白表達(dá)條件優(yōu)化
            2.7 重組N蛋白的純化
            2.8 間接ELISA方法的建立及條件優(yōu)化結(jié)果
            2.9 間接ELISA陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)的建立
            2.10 特異性試驗(yàn)
            2.11 敏感性試驗(yàn)
            2.12 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.13 符合率分析
            2.14 臨床血清樣品的檢測
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 豬流行性腹瀉病毒Nsp2基因原核表達(dá)與純化及蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 Nsp2基因的擴(kuò)增
            2.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定
            2.3 Nsp2基因序列測定
            2.4 重組Nsp2蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果
            2.5 表達(dá)產(chǎn)物Western-blotting鑒定結(jié)果
            2.6 重組Nsp2蛋白可溶性檢測
            2.7 重組Nsp2蛋白表達(dá)條件優(yōu)化
            2.8 重組Nsp2蛋白的純化
            2.9 雜交瘤細(xì)胞株的建立和抗體效價(jià)的測定
            2.10 單克隆抗體與原核表達(dá)蛋白反應(yīng)的特異性鑒定
            2.11 雜交瘤細(xì)胞株分泌MAb的穩(wěn)定性鑒定
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3044364