根據(jù)H9N2亞型禽流感病毒（AIV）的HA和NA基因的保守序列,設(shè)計(jì)2套特異性LAMP引物和2條探針引物,同時(shí)在2條探針的5′端分別標(biāo)記不同的熒光基團(tuán),在3′端都標(biāo)記猝滅基團(tuán),然后使用多色熒光成像儀觀察反應(yīng)后是否有熒光產(chǎn)生來(lái)判斷反應(yīng)管里是否有陽(yáng)性擴(kuò)增,通過(guò)熒光顏色的不同來(lái)分析陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物的類型。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法能特異性擴(kuò)增H9亞型和N2亞型AIV,對(duì)其他15個(gè)HA亞型和其余8個(gè)NA亞型AIV以及禽類常見(jiàn)病原體均無(wú)擴(kuò)增;干擾性試驗(yàn)結(jié)果顯示H9和N2兩種亞型AIV可以在同一反應(yīng)管中獨(dú)立完成擴(kuò)增,二者互不干擾;敏感性試驗(yàn)顯示其最低檢測(cè)限度為100拷貝/μL。試驗(yàn)結(jié)果表明本試驗(yàn)建立的二重?zé)晒釸T-LAMP檢測(cè)方法具備反應(yīng)快速、靈敏、特異性強(qiáng)同時(shí)可以用肉眼直接觀察辨別擴(kuò)增產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn),對(duì)H9N2亞型AIV臨床快速檢測(cè)具有較好的應(yīng)用前景。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(10)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

特異性試驗(yàn)在多色熒光成像系統(tǒng)雙通道下的觀察結(jié)果

干擾性試驗(yàn)在多色熒光成像系統(tǒng)下的觀察結(jié)果

RT-LAMP敏感性試驗(yàn)實(shí)時(shí)濁度儀檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]1株鵝源H9N2亞型禽流感病毒分子進(jìn)化分析及對(duì)鵝的致病性[J]. 張溢珊,陳濟(jì)鐺,陳建紅,劉敏芳,曹夢(mèng)蕊,張濟(jì)培.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(06)
[2]H9N2亞型流感病毒野鳥(niǎo)分離株HA受體親和特性鑒定及基因序列分析[J]. 劉夢(mèng)迪,姚貴哲,楊帆,孟慶峰,叢彥龍,王偉利,李玥.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(04)
[3]H7亞型和N9亞型禽流感病毒RT-LAMP可視化檢測(cè)方法的建立[J]. 羅思思,謝芝勛,謝麗基,鄧顯文,謝志勤,黃嬌玲,曾婷婷.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(07)
[4]新城疫病毒強(qiáng)弱毒株LAMP鑒別檢測(cè)方法的建立[J]. 陳安莉,謝芝勛,周辰瑜,劉加波,龐耀珊,鄧顯文,謝志勤,謝麗基.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2011(09)
[5]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用[J]. 劉寶山,潘樹(shù)德,尹榮煥,沈國(guó)順.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2009(07)
[6]禽流感病毒的研究進(jìn)展[J]. 劉洪雨,劉玉芬,于爾松.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2005(01)
[7]禽H9N2亞型流感病毒能感染人的發(fā)現(xiàn)[J]. 郭元吉,李建國(guó),程小雯,王敏,鄒毅,李釧華,蔡訪潺,廖華樂(lè),張燁,郭俊峰,黃瑞敏,貝東.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 1999(02)



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