本文旨在研究三種黑素皮質(zhì)素4受體（MC4R）激動(dòng)劑和拮抗劑對雞MC4R（cMC4R）WT及4個(gè)突變體（Q18H、G21R、S76L和L299P）cAMP/PKA信號通路的影響,建立了基于cMC4R信號通路以cMC4R為靶點(diǎn)的細(xì)胞篩選模型。將cMC4RWT及4個(gè)突變體的真核表達(dá)質(zhì)粒與螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、海腎熒光素酶內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染入HEK293T細(xì)胞,應(yīng)用雙報(bào)告基因法檢測受體在無配體作用時(shí)熒光素酶的表達(dá)水平;檢測受體在激動(dòng)劑（α-MSH、β-MSH、NDP-MSH）的作用下熒光素酶的表達(dá)量;將cMC4RWT真核表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒、內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,檢測受體在拮抗劑SHU9119和激動(dòng)劑（α-MSH、β-MSH、NDP-MSH）的共同作用下熒光素酶的表達(dá)量。將cMC4R WT真核表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒按1:5的比例共轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞,經(jīng)G418（800μg/ml）和潮霉素B（400μg/ml）抗性篩選后,利用有限稀釋法獲得穩(wěn)定表達(dá)目的基因的單克隆細(xì)胞株,利用RT-PCR從轉(zhuǎn)錄水平驗(yàn)證了目的基因的表達(dá)... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會第十一屆會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)討論會與中國毒理學(xué)會獸醫(yī)毒理專業(yè)委員會第五次學(xué)術(shù)研討會論文集中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會會議論文集

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