布拉氏酵母菌（Saccharomyces boulardii）是1920年從印尼水果中分離得到的一種非致病性酵母菌，作為益生菌被歐洲、非洲和南非等國家廣泛的應(yīng)用于治療和預(yù)防腹瀉和腸道失調(diào)。布拉氏酵母菌被認(rèn)為是最有價(jià)值的益生菌之一。傳統(tǒng)意義上，益生菌作為食物添加劑來改善腸道微生物平衡，還可以用來治療感染性胃腸炎和治療過程中抗生素引起的并發(fā)癥性腹瀉。對(duì)布拉氏酵母菌益生性的研究成為熱點(diǎn)。然而，多數(shù)研究著眼于生產(chǎn)和臨床應(yīng)用，關(guān)于布拉氏酵母菌益生機(jī)制特別是分子方面的研究卻很少。其主要的原因是，沒有適合布拉氏酵母菌的分子遺傳工具。包括關(guān)鍵基因的敲除、調(diào)控表達(dá)、表面展示等。研究表明，布拉菌是釀酒酵母（S. cerevisiae）的變異株。盡管很多研究證明布拉氏酵母菌是釀酒酵母的一個(gè)分支，但是卻有一些完全不同于釀酒酵母的生物學(xué)、生理學(xué)、代謝及遺傳學(xué)特性，例如，布拉氏酵母菌不能利用半乳糖，對(duì)低pH和溫度有很高的耐受性，并且在氮源缺乏時(shí)可以形成假菌絲，特別是布拉氏酵母菌是雙倍體而且不能孢子化。許多適用于釀酒酵母的分子遺傳工具不能直接用于布拉氏酵母菌。想要研究布拉氏酵母菌益生機(jī)制，需要構(gòu)建適合的分子遺傳工具... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)及縮略詞
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 S. boulardii 生物學(xué)分類
    1.2 S. boulardii 的培養(yǎng)特性
    1.3 S. boulardii 的作用機(jī)制及臨床應(yīng)用
        1.3.1 S. boulardii 的營養(yǎng)腸道的作用
        1.3.2 S. boulardii 對(duì)腸出血性大腸桿菌（EHEC）的拮抗作用
        1.3.3 S. boulardii 對(duì)腸致病性大腸桿菌（EPEC）的拮抗作用
        1.3.4 S. boulardii 對(duì)梭菌的拮抗作用
        1.3.5 S. boulardii 對(duì)霍亂弧菌的拮抗作用
        1.3.6 S. boulardii 的抗病毒作用
        1.3.7 S. boulardii 的抗癌作用
        1.3.8 S. boulardii 對(duì)嚙齒類枸櫞酸桿菌的拮抗作用
    1.4 S. boulardii 在畜牧業(yè)的應(yīng)用
    1.5 基因敲除技術(shù)研究進(jìn)展
        1.5.1 基因敲除技術(shù)概述
        1.5.2 噬菌體重組酶敲除系統(tǒng)
        1.5.3 基因敲除技術(shù)在釀酒酵母中的應(yīng)用
    1.6 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 質(zhì)粒和菌株
        2.1.2 主要儀器和設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 有關(guān)培養(yǎng)基和溶液的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.2 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 酵母菌的計(jì)數(shù)
        2.2.4 抗生素的篩選
        2.2.5 酵母基因組 DNA 的提取
        2.2.6 基因敲除盒的構(gòu)建
        2.2.7 布拉氏酵母菌的轉(zhuǎn)染
        2.2.8 URA3 基因的敲除
        2.2.9 MCD4 基因的敲除
        2.2.10 PCR 方法鑒定陽性轉(zhuǎn)染子
        2.2.11 敲除基因重新導(dǎo)入實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 外源基因的刪除
        2.2.13 生長曲線的測定
        2.2.14 葡聚糖的測定
        2.2.15 細(xì)胞壁敏感性的測定
3 試驗(yàn)結(jié)果
    3.1 布拉氏酵母基因敲除系統(tǒng)的構(gòu)建
        3.1.1 抗生素的篩選
        3.1.2 pYES2-KanMX 的構(gòu)建
        3.1.3 誘導(dǎo)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.4 pSbGDDH 的構(gòu)建
        3.1.5 pSbMUDH 的構(gòu)建
        3.1.6 pSbMR 的構(gòu)建
    3.2 URA3 基因缺失突變株的構(gòu)建
        3.2.1 URA3 短同源臂敲除盒的構(gòu)建
        3.2.2 URA3 長同源臂基因敲除盒的構(gòu)建
        3.2.3 URA3 等位基因的敲除
        3.2.4 刪除外源基因
        3.2.5 URA3 基因重新導(dǎo)入試驗(yàn)
    3.3 MCD4 基因缺失突變株的構(gòu)建及表型研究
        3.3.1 MCD4 短同源臂敲除盒
        3.3.2 MCD4 長同源臂基因敲除盒構(gòu)建
        3.3.3 MCD4 等位基因的敲除
        3.3.4 MCD4 基因重新導(dǎo)入結(jié)果
        3.3.5 MCD4 基因突變株表型的研究
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]布拉氏酵母菌特性及培養(yǎng)條件的研究[J]. 肖永友,方志逸,陳倩婷,尹翠金,朱麗如.  飼料研究. 2010(03)



本文編號(hào)：3041276