隨著現(xiàn)代規(guī)�；B(yǎng)殖程度的不斷提高，氧化應(yīng)激在商品豬生產(chǎn)中的危害日益顯現(xiàn)。銅鋅超氧化物歧化酶（CuZnSOD）是一種重要的抗氧化酶，在維持生物體內(nèi)氧自由基平衡方面發(fā)揮重要作用。CuZnSOD廣泛分布于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，約占SOD總量的90%。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，許多物種的CuZnSOD基因組序列已被克隆出來(lái)。目前CuZnSOD基因的研究多集中于其功能方面，而對(duì)于表達(dá)調(diào)控機(jī)制并不清楚。為了進(jìn)一步研究CuZnSOD基因的結(jié)構(gòu)與功能以及驗(yàn)證CuZnSOD基因在提高肌肉抗氧化能力方面的功能，本研究進(jìn)行了以下研究，一是PCR克隆CuZnSOD基因的啟動(dòng)子區(qū)，對(duì)其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了探討，二是通過(guò)制備轉(zhuǎn)CuZnSOD基因肉兔模型來(lái)研究并驗(yàn)證CuZnSOD對(duì)肌肉抗氧化性能等肉質(zhì)性狀影響的重要功能和育種價(jià)值。主要研究結(jié)果如下：1.利用PCR方法從萊蕪豬基因組克隆CuZnSOD基因5′上游853bp的片段，然后通過(guò)巢式PCR方法獲得5′末端逐漸截短的啟動(dòng)子系列片段，并將這些片段定向插入到熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體（PGL3-Basic）中。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NIH/3T3細(xì)胞，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)啟動(dòng)子活性結(jié)果顯示，-3... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CuZnSOD基因啟動(dòng)子PCR檢測(cè)結(jié)果

圖 1 CuZnSOD 基因啟動(dòng)子 PCR 檢測(cè)結(jié)果Fig.1 PCR results of CuZnSOD gene promoter豬 CuZnSOD 基因 5′端序列的生物信息學(xué)分析研究采用 PCR方法從豬基因組克隆得到 CuZnSOD基因5′上游調(diào)控區(qū) 853生物信息學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn)，在豬 CuZnSOD 基因 5′端-87bp 和-266bp 處存錄起始位點(diǎn)（TSS），缺乏經(jīng)典的 CAAT-box 和 GC-box 保守序列，但檢測(cè)box（圖 2）。

圖 3 PCR 擴(kuò)增 CuZnSOD 基因 5′端不同長(zhǎng)度缺失片段 2000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 453bp；6: 353bp；7: 2Figure.3 PCR amplification of various length deletion fragments of CuZnSOD gene promoter素酶表達(dá)載體的構(gòu)建及酶切鑒定的熒光素酶報(bào)告基因載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶 Mlu I 和 Bgl II 雙酶切，糖凝膠電泳分離（圖 4）。檢測(cè)結(jié)果表明，酶切下的目的片段大小與體進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果亦表明插入片段序列及方向正確無(wú)誤。圖 4 重組載體的酶切鑒定NA marker；M2: 10000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 4537: 233bpFigure.4 Identification of recombinant plasmids with digestion

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]利用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因小鼠疾病模型的初步研究[D]. 董煥聲.萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院 2006
[4]用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的研究[D]. 牟紅梅.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2002



本文編號(hào)：3039701