禽戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）是雞大肝大脾（Big liver and spleendisease，BLS）病或肝炎脾大（Hepatitis-Splenomegaly，HS）綜合癥的主要病原，主要引起30-72周齡的蛋雞和肉種雞的死淘率升高和產(chǎn)蛋率下降（20-40%），發(fā)病雞通常腹部充血，卵巢退化，肝臟脂肪或淀粉樣變性，偶有肝脾腫大。該病曾給澳大利亞的養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，而我國也時有該病爆發(fā)的報道。禽HEV與人、豬HEV同屬于肝炎病毒屬，為無囊膜，單股正鏈RNA病毒，其基因組全長約為6.6kb，比哺乳動物HEV基因組全長少600bp左右，包含5’帽子和3’PolyA結(jié)構(gòu)，含有3個開放閱讀框（Open reading frame，ORF），分別為ORF1、ORF2和ORF3。其中ORF2基因編碼衣殼蛋白是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，并且包含病毒主要的抗原表位。本研究以獸醫(yī)免疫生物學(xué)實驗室分離的禽HEV中國分離株（CaHEV）為材料基礎(chǔ)，利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建和表達CaHEV ORF2蛋白C端268個氨基酸，純化后獲得蛋白ORF2-268，將該蛋白作為包被抗原... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 戊型肝炎的研究進展
        1.1.1 戊型肝炎病毒病原學(xué)研究
        1.1.2 戊型肝炎病毒基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 戊型肝炎病毒宿主范圍
        1.1.4 戊型肝炎的流行病學(xué)
        1.1.5 戊型肝炎的臨床表現(xiàn)
        1.1.6 戊型肝炎病毒的檢測方法
        1.1.7 戊型肝炎病毒疫苗的研究
    1.2 禽戊型肝炎病毒研究概況
        1.2.1 禽戊型肝炎病毒病原學(xué)
        1.2.2 禽戊型肝炎病毒流行病學(xué)
        1.2.3 禽戊型肝炎病毒免疫學(xué)
    1.3 本研究的目的及意義
第二章 間接 ELISA 檢測禽 HEV 抗體方法的建立
    2.1 材料
        2.1.1 毒株，載體與菌種
        2.1.2 實驗試劑和耗材
        2.1.3 主要設(shè)備和儀器
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 設(shè)計和合成引物
        2.2.2 獲得目的基因并測序
        2.2.3 帶有酶切位點引物的設(shè)計
        2.2.4 目的基因和載體的雙酶切
        2.2.5 篩選陽性克隆
        2.2.6 表達和純化蛋白
        2.2.7 敲定最終的間接 ELISA 檢測血清方法
        2.2.8 建立 ELISA 方法的重復(fù)性分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 鑒定重組質(zhì)粒
        2.3.2 優(yōu)化重組蛋白表達條件
        2.3.3 Western blot 鑒定表達的重組蛋白
        2.3.4 純化蛋白
        2.3.5 建立間接 ELISA 方法檢測血清抗體
    2.4 討論與分析
第三章 我國雞群戊型肝炎的血清學(xué)檢測
    3.1 材料
        3.1.1 雞血清
        3.1.2 ELISA 檢測抗原
        3.1.3 實驗試劑和耗材
        3.1.4 儀器和設(shè)備
        3.1.5 配制試劑
    3.2 方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 不同省市雞群禽 HEV抗體檢測結(jié)果
        3.3.2 不同品種雞群禽 HEV抗體檢測結(jié)果
        3.3.3 不同周齡雞群禽 HEV抗體檢測結(jié)果
    3.4 討論和分析
第四章 我國雞群的戊型肝炎病毒分子流行病學(xué)調(diào)查
    4.1 材料
        4.1.1 表達載體和菌種
        4.1.2 實驗試劑和耗材
        4.1.3 主要設(shè)備和儀器
        4.1.4 主要試劑的配制
        4.1.5 檢測樣品的收集
    4.2 方法
        4.2.1 設(shè)計引物
        4.2.2 Trizol 方法提取病毒 RNA
        4.2.3 RT-PCR檢測
        4.2.4 回收并純化 PCR產(chǎn)物
        4.2.5 連接至載體
        4.2.6 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
        4.2.7 轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物
        4.2.8 提質(zhì)粒
        4.2.9 雙酶切鑒定
        4.2.10 比對序列
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 RT-PCR檢測結(jié)果
        4.3.2 雙酶切鑒定克隆質(zhì)粒
        4.3.3 與 GenBank 上已知序列的同源性關(guān)系
        4.3.4 進化樹分析
    4.4 討論和分析
結(jié)論
參考文獻
英文縮略詞
致謝
作者簡介、發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]陜西省PRRSV與CSFV、PCV2、PRV混合感染的檢測[J]. 王波,張鵬,楊增岐,張淑霞,黨如意,劉芳寧,黃建寧,樊榮,劉海生.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2009(05)
[2]禽戊型肝炎病毒人獸共感染的可能性研究[J]. 周恩民,荊勝濤,彭軍,孫培明,張璐,董施偉.  中國家禽. 2009(01)
[3]禽戊型肝炎血清學(xué)調(diào)查以及與肝脾腫大綜合征關(guān)系的研究[J]. 張璐,周恩民,崔治中,董施偉,荊勝濤,彭軍,孫陪明,孫淑紅,秦卓明.  中國家禽. 2008(20)
[4]人、豬、禽戊型肝炎病毒血清學(xué)關(guān)系的研究[J]. 梁久紅,孟繼鴻.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2007(07)
[5]戊型肝炎病毒之研究進展[J]. 曲立春,郭志儒,王遠志,張輝.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2006(08)
[6]Hepatitis E virus chimeric DNA vaccine elicits immunologic response in mice[J]. Yan Hong, Lian-Hua Yang, Yong Chen, Luo Jing, Yi-Ting Wang, Hua-Jun Hu, Institute of Bioengineering, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310013, Zhejiang Province, China Bing Ruan, Zhejiang University Medical School, Hangzhou 310003, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(42)
[7]基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高靈敏度通用引物的設(shè)計和初步應(yīng)用[J]. 葛勝祥,郭清順,李少偉,張軍,夏寧邵.  病毒學(xué)報. 2005(03)
[8]雞大肝大脾病毒RT-PCR檢測方法的建立及其檢測[J]. 馬玉玲,楊德吉,陸承平.  中國病毒學(xué). 2005(02)
[9]新疆地區(qū)豬戊型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 馬勛,陸承平,孟繼鴻.  中國病毒學(xué). 2004(03)
[10]表達戊型肝炎病毒ORF2蛋白的重組腺病毒構(gòu)建及其經(jīng)粘膜途徑免疫小鼠[J]. 董雪,胡金勇,謝天宏,孫茂盛,戴長柏,馬雁冰.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 2003(03)



本文編號：3038256