豬丹毒絲菌為革蘭氏陽性無芽孢桿菌,主要對豬有致病作用,引起的疾病稱為豬丹毒。本實驗以豬丹毒絲菌為研究對象,應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)對其抗原表位和表面分子結(jié)合肽（SMBP）進行研究,主要實驗如下：通過菌體抗原吸附和重組葡萄球菌蛋白A （SPA）親和層析組合方法,從豬血清中純化豬丹毒絲菌特異性多克隆抗體,應(yīng)用噬菌體展示技術(shù),從隨機12肽庫中篩選豬丹毒絲菌的模擬抗原表位。經(jīng)過不同形式的三輪篩選,隨機挑取224個噬菌體測序,總共獲得36個模擬表位。同時以豬丹毒絲菌全菌作為靶分子,同樣用噬菌體12肽庫進行三輪不同形式的篩選,隨機挑取144個噬菌體測序,獲得66個豬丹毒表面分子結(jié)合肽（SMBP）。篩選的模擬表位通過間接ELISA方法驗證有11個呈陽性,其中有三個與BSA（牛血清白蛋白）反應(yīng)較高。免疫印跡分析這11個模擬表位,表位15（GPKSNNVGVTYS）具有反應(yīng)原性。根據(jù)分子識別的反義肽理論,配體的反義肽應(yīng)該與該配體相對應(yīng)的受體具有同源性關(guān)系,反之亦然。本次實驗篩選的36個豬丹毒模擬抗原表位有27個的反義肽（其中有9個是ELISA驗證為陽性的表位）與其相對應(yīng)的SMBP有同源性關(guān)系,雖然同源性不高,... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻綜述
    第一節(jié) 豬丹毒絲菌的研究概況
    第二節(jié) 噬菌體展示技術(shù)用于抗原表位的篩選
    第三節(jié) 研究的目的與意義
第二章 豬丹毒絲菌多克隆抗體的制備
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 陽性血清的選擇
            1.2.2 菌體抗原吸附法純化特異性抗體
            1.2.3 血清與細菌的用量
            1.2.4 血清稀釋對抗原吸附純化效果的影響
            1.2.5 吸附的飽和時間
            1.2.6 洗脫的效果
            1.2.7 血清的再次吸附
            1.2.8 SPA親和層析及純化IgG的純度、效價和濃度的檢測
    2 結(jié)果和分析
        2.1 豬血清的選擇
        2.2 豬丹毒絲菌特異性抗體的菌體抗原吸附純化
        2.3 血清和細菌的用量
        2.4 血清稀釋后的吸附純化的結(jié)果
        2.5 吸附和洗脫時間
        2.6 血清再次特異性純化的結(jié)果
        2.7 SPA親和層析后IgG的純度、效價和濃度
    3 討論
第三章 噬菌體展示技術(shù)篩選豬丹毒絲菌模擬抗原表位
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 方法
            1.2.1 豬丹毒模擬抗原表位的噬菌體篩選
            1.2.2 測序及序列分析
            1.2.3 噬菌體的ELISA分析
            1.2.4 噬菌體的免疫印跡分析
    2 結(jié)果和分析
        2.1 篩選結(jié)果
        2.2 噬菌體測序和序列分析
        2.3 模擬表位的ELISA驗證
        2.4 免疫印跡分析
    3 討論
第四章 噬菌體展示技術(shù)篩選豬丹毒絲菌表面分子結(jié)合肽
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 方法
            1.2.1 豬丹毒絲菌表面分子結(jié)合肽（SMBP）的噬菌體篩選
            1.2.2 豬丹毒絲菌SMBP的初步驗證
            1.2.3 豬丹毒絲菌SMBP與2型和7型豬鏈球菌的相關(guān)性分析
    2 結(jié)果和分析
        2.1 豬丹毒絲菌SMBP的篩選
        2.2 SMBP的ELISA驗證
        2.3 2型和7型豬鏈球菌檢測豬丹毒SMBP
    3 討論
結(jié)論
參考文獻
符號說明
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3036820