幼畜體外胚胎生產(chǎn)和移植技術(shù)（juvenile in vitro embryo transfer, JIVET）是一項(xiàng)集幼畜超數(shù)排卵、卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精、胚胎體外培養(yǎng)及胚胎移植為一體的技術(shù)。JIVET技術(shù)能夠大大地縮短家畜繁殖的世代間隔,充分發(fā)掘優(yōu)良母畜的繁殖潛能,提高畜群的遺傳改良速度與生產(chǎn)效率,為家畜育種提供豐富的遺傳資源。體外受精技術(shù)是JIVET技術(shù)的一個(gè)重要環(huán)節(jié),通過(guò)提高體外受精培養(yǎng)效果,能顯著提高后期胚胎的生長(zhǎng)及發(fā)育質(zhì)量,有效地提高JIVET技術(shù)的生產(chǎn)效率。本研究以新西蘭幼齡兔為主要研究對(duì)象,經(jīng)幼齡兔超數(shù)排卵和卵母細(xì)胞體外成熟,對(duì)體外培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精。在受精培養(yǎng)體系中添加不同濃度EGCG（0、5、10、15、20、25μM）,以研究抗氧化劑EGCG對(duì)精子獲能及幼齡兔卵母細(xì)胞受精的影響,并且與受精液添加相同濃度EGCG的成年兔體外受精效果進(jìn)行對(duì)比研究,旨在建立一種高效的培養(yǎng)體系,改善幼齡兔卵母細(xì)胞體外受精培養(yǎng)效果。并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)對(duì)OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼齡兔及成年兔體外受精生產(chǎn)胚胎中的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行研究,從分子水平研究這兩類早期胚胎... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
目錄
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 幼畜體外胚胎生產(chǎn)和移植技術(shù)
        1.1 幼畜超數(shù)排卵
        1.2 卵母細(xì)胞體外成熟
        1.3 體外受精
            1.3.1 精子體外獲能（In Vitro Capacitation）及機(jī)制
            1.3.2 受精
        1.4 體外胚胎培養(yǎng)
    2 表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）
        2.1 EGCG概述
        2.2 EGCG抗氧化作用
        2.3 EGCG在胚胎體外生產(chǎn)中的應(yīng)用
    3 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因相關(guān)研究
        3.1 OCT-4基因
        3.2 GDF9基因
        3.3 Bcl2基因
    4 本次研究的目的與意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 EGCG對(duì)新西蘭兔卵母細(xì)胞體外受精的影響
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 器材的準(zhǔn)備
            1.4.1 玻璃器皿的準(zhǔn)備
            1.4.2 手術(shù)器械的準(zhǔn)備
            1.4.3 橡膠塞的處理
        1.5 主要溶液配置
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 試驗(yàn)安排
        2.2 試驗(yàn)內(nèi)容
            2.2.1 超數(shù)排卵處理方法
            2.2.2 卵母細(xì)胞獲取
            2.2.3 卵母細(xì)胞體外成熟
            2.2.4 卵母細(xì)胞體外受精
            2.2.5 精子獲能評(píng)價(jià)
        2.3 數(shù)據(jù)分析
    3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.1 添加不同濃度EGCG對(duì)精子獲能后頂體反應(yīng)的影響
        3.2 不同濃度EGCG對(duì)幼齡兔卵母細(xì)胞體外受精的影響
        3.3 不同濃度EGCG對(duì)成兔卵母細(xì)胞體外受精的影響
        3.4 幼齡兔與成年兔卵母細(xì)胞體外受精效果比較
    4 分析與討論
        4.1 EGCG對(duì)精子獲能的影響
        4.2 EGCG在體外受精中的作用
        4.3 幼齡兔與成年兔卵母細(xì)胞體外受精效果比較
    參考文獻(xiàn)
第三章 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在新西蘭成年和幼齡兔胚胎中的差異表達(dá)研究
    1 試驗(yàn)材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)試劑
        1.3 試驗(yàn)儀器
        1.4 溶液配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 胚胎選擇
        2.2 總RNA提取
        2.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.4 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因PCR擴(kuò)增
        2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 總RNA的檢測(cè)
        3.2 目的基因的擴(kuò)增
        3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)物的特異性檢測(cè)
        3.4 基因擴(kuò)增效率一致性的判定
        3.5 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼齡和成年兔胚胎中相對(duì)表達(dá)變化
    4 討論
        4.1 OCT-4基因表達(dá)分析
        4.2 GDF-9基因表達(dá)分析
        4.3 Bcl-2基因表達(dá)分析
        4.4 幼齡兔與成年兔基因表達(dá)量差異分析
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文及獲得專利情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羔羊卵母細(xì)胞體外胚胎生產(chǎn)影響因素分析[J]. 郭洪,萬(wàn)鵬程,代蓉,石國(guó)慶.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(19)
[2]影響羔(綿)羊超數(shù)排卵效果因素的研究[J]. 張效生,張金龍,崔茂盛,李義海,馮建忠.  中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué). 2013(05)
[3]精子獲能時(shí)間及精卵共孵育時(shí)間對(duì)小鼠體外受精和胚胎發(fā)育的影響[J]. 段彪,杜海燕,張榮.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2013(07)
[4]犢牛超數(shù)排卵方法的研究[J]. 鄭自華,毛獻(xiàn)寶,陳寶劍,潘斌,黎江,范曉明,沈創(chuàng),韋英明.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2012(07)
[5]羔羊超數(shù)排卵與胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 李運(yùn)生,曹鴻國(guó),劉亞,韓春楊,陶勇,張運(yùn)海.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(11)
[6]Oct4基因的研究進(jìn)展[J]. 鄭鵬生,曹浩哲.  西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(05)
[7]溫度對(duì)藍(lán)狐精子獲能的影響[J]. 于翠平,白玉妍,郭婷婷,劉志平.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2010(11)
[8]母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在綿羊卵母細(xì)胞和早期胚胎中的表達(dá)[J]. 侯敏,林嘉鵬,白潔,趙云程,汪立琴,陳世彬,葉小芳,黃俊成.  中國(guó)草食動(dòng)物. 2010(02)
[9]哺乳動(dòng)物的精子獲能及其鑒定[J]. 張士芳.  黑龍江動(dòng)物繁殖. 2010(02)
[10]異源Oct-4基因啟動(dòng)子在豬、兔和小鼠早期胚胎中的時(shí)空表達(dá)活性[J]. 張穎,史芳瑜,高紹榮,林愛星.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(09)

碩士論文
[1]生長(zhǎng)分化因子9對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟及早期胚胎發(fā)育的影響及機(jī)制研究[D]. 李燕.南京師范大學(xué) 2013
[2]幼齡新西蘭兔超數(shù)排卵及其不同日齡FSHR基因表達(dá)量變化的研究[D]. 鄒恒.揚(yáng)州大學(xué) 2010
[3]表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）對(duì)昆明小鼠新鮮/凍融精子體外受精胚胎發(fā)育的影響[D]. 劉婉敏.汕頭大學(xué) 2009
[4]兔GDF9的克隆與在性腺中的定位及表達(dá)豐度研究[D]. 季金強(qiáng).揚(yáng)州大學(xué) 2008
[5]小鼠體外受精胚與體內(nèi)胚Oct4基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化差異的研究[D]. 儲(chǔ)成風(fēng).安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[6]不同添加物對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精及受精卵體外培養(yǎng)的影響[D]. 王紅玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3036440