單增李斯特菌是食源性革蘭氏陽性病原體,可穿越人體三大屏障,李斯特菌溶血素S（ListeriolysinS;LLS）是一種細菌素,調(diào)節(jié)宿主的腸道微生物菌群并使細胞產(chǎn)生溶血反應(yīng),幫助LM跨越血腸屏障,李斯特菌溶血素O（ListeriolysinO,LLO）是LM的主要致病因子,可溶解細胞吞噬體膜幫助LM逃離吞噬體,進入胞液并增值。以本實驗室已成功構(gòu)建并保存的LM90SB2Δlls為基礎(chǔ)構(gòu)建LM90SB2Δlls-Δllo缺失株,進行免疫保護性試驗,探究LM90SB2及其重要毒力因子缺失株的免疫原性及人工胃液耐受性。方法:1.參考F2365菌株并設(shè)計引物,PCR分別擴增hly基因的上下游同源臂,運用重疊PCR技術(shù)得到Δhly融合片段再連接溫敏穿梭載體pKSV7,得到質(zhì)粒pKSV7-Δhl y,測序驗證后將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入LM90SB2Δlls感受態(tài)細胞,在氯霉素與溫度的雙重壓力下進行傳代培養(yǎng)使菌株完成同源重組,期間運用旁外側(cè)引物篩選出已成功同源重組的短帶缺失株,并繼續(xù)在30°C且無氯霉素抗性的條件下將傳代從而獲得無氯霉素抗性的LM90SB2Δlls-Δllo。2.測定LM90SB2和LM90S... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述 單核細胞增多癥李斯特菌的研究進展
    引言
    1 單增李斯特菌的生物學特性
    2 單增李斯特菌所含毒力因子及致病機理
        2.1 溶血素S
        2.2 溶血素O
    3 單增李斯特菌可誘發(fā)的免疫應(yīng)答
    4 單增李斯特菌作為載體疫苗
    5 單增李斯特菌人工胃液耐受試驗研究進展
第二章 試驗研究
    試驗一單增李斯特菌LM90SB2ΔLLS-ΔLLO的構(gòu)建
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株和質(zhì)粒
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 試驗所需儀器
            1.2 方法
                1.2.1 引物設(shè)計合成
                1.2.2 LM90SB2SB2 菌株DNA的提取
                1.2.3 hly基因上下游臂的擴增
            1.3 構(gòu)建pKSV7-Δhly質(zhì)粒
            1.4 LM90SB2Δlls-Δllo缺失株的構(gòu)建、篩選與鑒定
                1.4.1 制備LM90SB2Δlls感受態(tài)細胞
                1.4.2 電轉(zhuǎn)化
            1.5 LM90SB2Δlls-Δllo缺失株遺傳穩(wěn)定性檢測
        2 結(jié)果
            2.1 上下游臂的擴增
            2.2 hly基因重疊延伸PCR擴增
            2.3 重組穿梭質(zhì)粒pKSV7-Δhly的鑒定
            2.4 LM90SB2Δlls-Δllo的鑒定
            2.5 遺傳穩(wěn)定性檢測
        3 討論
    試驗二單增李斯特菌LM90SB2Δlls-Δllo部分生物學特性研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗菌株
                1.1.2 實驗動物
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 主要儀器
            1.2 方法
                1.2.1 測定LM90SB2、LM90SB2Δlls-Δllo的生長曲線
                1.2.2 LM90SB2與LM90SB2Δlls-ΔlloLD50 的測定
                1.2.3 LM90SB2與LM90SB2Δlls-Δllo腦肝脾載菌量的測定
        2 結(jié)果
            2.1 生長曲線的測定
            2.2 測定LM90SB2、LM90SB2Δlls-Δllo的半數(shù)致死量
            2.3 LM90SB2與LM90SB2Δlls-Δllo腦、肝、脾載菌量的測定
        3 討論
    試驗三 LM90SB2與LM90SB2Δlls-Δllo在人工胃液中的耐受性研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗菌株
                1.1.2 主要試劑
            1.2 試驗方法
                1.2.1 菌液的制備
                1.2.2 人工胃液的配置
        2 結(jié)果
        3 討論
    試驗四小鼠的免疫保護性研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗菌株
                1.1.2 實驗動物
                1.1.3 主要試劑及試劑盒
                1.1.4 主要儀器
            1.2 方法
                1.2.1 小鼠血清單增李斯特菌抗體含量檢測
                1.2.2 小鼠免疫保護性試驗
        2 結(jié)果
            2.1 小鼠血清單增李斯特菌抗體含量檢測
            2.2 小鼠免疫保護率
        3 討論
第三章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
[1]加拿大食品安全協(xié)同治理建設(shè)舉措及啟示[J]. 楊麗賢,陳永法.  中國食品衛(wèi)生雜志. 2020(01)
[2]單增李斯特菌致流產(chǎn)小鼠子宮中Th1和Th2細胞因子的變化[J]. 李文艷,張娜,李曉寧,劉純甫,梁子騰,仲飛,管越強.  河北大學學報(自然科學版). 2020(01)
[3]單核細胞增生李斯特菌SigB調(diào)控GadD3的抗酸應(yīng)激作用[J]. 王宜,方小偉,劉慧娟,萬嬌紅,郭騫,張鈺,田棋,方春.  動物醫(yī)學進展. 2020(01)
[4]食源性單增李斯特菌LIPI-4基因的檢測及序列分析[J]. 劉揚揚,康立超,馬勛,李紅歡,錢凌霄,李慶輝.  中國獸醫(yī)學報. 2019(12)
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碩士論文
[1]單增李斯特菌感染依賴溶血素LLO觸發(fā)ERK1/2磷酸化機制研究[D]. 馬天天.浙江農(nóng)林大學 2019
[2]單增李斯特菌氧化還原蛋白YjbH調(diào)控的抗氧化應(yīng)激和細菌感染機制研究[D]. 韓笑.浙江農(nóng)林大學 2019
[3]單增李斯特菌lmo2193基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學特性研究[D]. 李紅歡.石河子大學 2019
[4]單核細胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學特性的研究[D]. 尹華.石河子大學 2018
[5]單增李斯特菌氨基肽酶Lmo1711以及鞭毛結(jié)構(gòu)蛋白FlhB的生物學功能研究[D]. 王航.浙江農(nóng)林大學 2018
[6]單增李斯特菌免疫檢測方法的建立[D]. 趙萌.天津科技大學 2018
[7]餐飲業(yè)廚房中單增李斯特菌污染情況及控制方法[D]. 潘琳.東北農(nóng)業(yè)大學 2017
[8]低溫水產(chǎn)品中單增李斯特菌的危害評價及細菌素復(fù)合纖維的抑菌效應(yīng)[D]. 張雪梅.廣東海洋大學 2017
[9]單增李斯特菌ΔInlAB、ΔInlABC突變株的構(gòu)建及部分生物學特性研究[D]. 陳云飛.石河子大學 2015
[10]單增李斯特菌溶血素O單克隆抗體的制備及其間接夾心ELISA檢測方法的初步建立[D]. 孔德壯.西北農(nóng)林科技大學 2010



本文編號：3035942