為探討豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）去核定位信號(hào)結(jié)構(gòu)蛋白（Cap）的生物學(xué)功能及其在血清學(xué)檢測(cè)中的作用,應(yīng)用Oligo 7.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物序列,采用PCR方法從PCV3福建株陽性核酸中擴(kuò)增獲得其去核定位信號(hào)的Cap基因片段。將目的片段克隆到原核表達(dá)載體pET28a（+）上獲得陽性重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-Cap,進(jìn)行原核表達(dá)條件優(yōu)化。經(jīng)SDS-PAGE分析其最優(yōu)表達(dá)條件為IPTG濃度為0.4 mmol/L、37℃誘導(dǎo)表達(dá)4 h,目的蛋白大小約為25 ku。表達(dá)的去核定位信號(hào)Cap蛋白經(jīng)Western blot和ELISA分析,具有良好的生物學(xué)活性。研究結(jié)果為開展PCV3去核定位信號(hào)基因功能研究和儲(chǔ)備血清學(xué)診斷試劑盒奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

間接ELISA特異性檢測(cè)

利用EcoRⅠ、HindⅢ對(duì)原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET28a-Cap進(jìn)行雙酶切,經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析,陽性重組質(zhì)粒酶切后可見2個(gè)條帶(pET28a載體條帶和目的基因條帶,約5 000 bp和550 bp),而陰性質(zhì)粒僅1個(gè)條帶(pET28a載體條帶,約5 000 bp)(圖1)。2.2 SDS-PAGE分析

將原核表達(dá)陽性重組質(zhì)粒pET28a-Cap的菌液經(jīng)不同濃度IPTG、不同溫度和時(shí)間進(jìn)行條件優(yōu)化后,獲得最適條件為IPTG濃度0.4 mmol/L、37℃誘導(dǎo)表達(dá)4 h。經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè),可見在25 ku左右處有1條明顯的蛋白帶,與預(yù)期結(jié)果相符,主要存在包涵體中(圖2)。2.3 Western blot鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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