為探討豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）去核定位信號結構蛋白（Cap）的生物學功能及其在血清學檢測中的作用,應用Oligo 7.0軟件設計特異性引物序列,采用PCR方法從PCV3福建株陽性核酸中擴增獲得其去核定位信號的Cap基因片段。將目的片段克隆到原核表達載體pET28a（+）上獲得陽性重組表達質粒pET28a-Cap,進行原核表達條件優(yōu)化。經SDS-PAGE分析其最優(yōu)表達條件為IPTG濃度為0.4 mmol/L、37℃誘導表達4 h,目的蛋白大小約為25 ku。表達的去核定位信號Cap蛋白經Western blot和ELISA分析,具有良好的生物學活性。研究結果為開展PCV3去核定位信號基因功能研究和儲備血清學診斷試劑盒奠定了基礎。 

【文章來源】：動物醫(yī)學進展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

間接ELISA特異性檢測

利用EcoRⅠ、HindⅢ對原核表達重組質粒pET28a-Cap進行雙酶切,經10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析,陽性重組質粒酶切后可見2個條帶(pET28a載體條帶和目的基因條帶,約5 000 bp和550 bp),而陰性質粒僅1個條帶(pET28a載體條帶,約5 000 bp)(圖1)。2.2 SDS-PAGE分析

將原核表達陽性重組質粒pET28a-Cap的菌液經不同濃度IPTG、不同溫度和時間進行條件優(yōu)化后,獲得最適條件為IPTG濃度0.4 mmol/L、37℃誘導表達4 h。經SDS-PAGE檢測,可見在25 ku左右處有1條明顯的蛋白帶,與預期結果相符,主要存在包涵體中(圖2)。2.3 Western blot鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
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