腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）是由Carswell等人發(fā)現(xiàn)的一種能夠殺傷腫瘤細(xì)胞的炎性細(xì)胞因子。其由自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生,具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化、殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等多種生物功能,不僅能幫助機(jī)體抵抗如大腸桿菌、結(jié)核分枝桿菌等病原微生物的感染,還能與其它細(xì)胞因子一起參與機(jī)體自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。TNF-α作為一種評(píng)價(jià)牛結(jié)核病、牛乳房炎等牛疾病的重要指標(biāo),具有重要的應(yīng)用價(jià)值和臨床意義。本研究旨在制備出基于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)牛胞內(nèi)TNF-α的單克隆抗體,為診斷相關(guān)牛疾病提供原材料。1.牛TNF-α基因的克隆及原核表達(dá)分離荷斯坦奶牛外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）,加入佛波酯（PMA）刺激6h后提取細(xì)胞總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板擴(kuò)增目的基因BoTNF-α,將擴(kuò)增成功的目的基因連入原核表達(dá)載體pET-30a（+）和pGEX-6p-1中構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒。經(jīng)過(guò)PCR、酶切、測(cè)序驗(yàn)證正確后,將兩種載體分別導(dǎo)入宿主表達(dá)菌BL21（DE3）及BL21中,構(gòu)建重組表達(dá)菌 BL21（DE3）（pET-30a（+）-B... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
綜述 腫瘤壞死因子α的研究進(jìn)展
    1 TNF-α生物學(xué)特性與功能的研究
        1.1 TNF-α的來(lái)源與結(jié)構(gòu)
        1.2 TNF-α的配體和受體
        1.3 TNF-α介導(dǎo)的信號(hào)通路
        1.4 TNF-α抗感染的作用
    2 TNF-α在疾病中的作用
        2.1 TNF-α在癌癥中的作用
        2.2 TNF-α在結(jié)核病中的作用
        2.3 TNF-α在腦缺血、心血管疾病等中的作用
    3 TNF-α單克隆抗體的研究進(jìn)展及應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
第一章 牛TNF-α基因的克隆及原核表達(dá)
    1 材料與試劑
        1.1 質(zhì)粒及菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 BoTNF-α基因的克隆
        2.2 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3 原核表達(dá)菌的構(gòu)建與鑒定
        2.4 重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)及重組蛋白的純化
        2.5 重組菌誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE鑒定及Western blot分析
    3 結(jié)果
        3.1 原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        3.2 重組菌誘導(dǎo)表達(dá)及純化產(chǎn)物的SDS-PAGE分析
        3.3 重組菌誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)特性鑒定
        3.4 重組蛋白rHis-BoTNF-α及rGST-BoTNF-α蛋白濃度的測(cè)定
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
第二章 牛TNF-α單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用
    1 材料與試劑
        1.1 細(xì)胞
        1.2 試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 方法
        2.1 小鼠免疫
        2.2 細(xì)胞融合
        2.3 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的篩選
        2.4 陽(yáng)性細(xì)胞的亞克隆
        2.5 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇
        2.6 腹水的制備
        2.7 單克隆抗體的鑒定
        2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)方法的初步建立
        2.9 單克隆抗體的初步應(yīng)用
    3 結(jié)果
        3.1 牛TNF-α單克隆抗體的鑒定
        3.2 流式檢測(cè)方法的初步建立
        3.3 單克隆抗體的初步應(yīng)用
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]流式細(xì)胞術(shù)在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用研究[J]. 余娟,徐彥召,劉興友.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2018(21)
[2]胃癌患者血清中腫瘤壞死因子-α和白介素-6水平檢測(cè)及其臨床診斷價(jià)值[J]. 姜春霞,陳闊.  腫瘤基礎(chǔ)與臨床. 2017(01)
[3]隱性乳房炎病牛乳清中IL-8及TNF-α含量的變化[J]. 尹柏雙,王秋竹,付連軍,郝景鋒,沙萬(wàn)里,王奔,鄭洪娟,苗玉輝.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(02)
[4]負(fù)性共刺激分子免疫球蛋白BTLA的特點(diǎn)及其在肺結(jié)核病灶組織中的表達(dá)[J]. 程曉菊,周國(guó)旗.  貴州醫(yī)藥. 2016(08)
[5]芍藥苷對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞TNFR1/NF-κB信號(hào)通路的抑制作用[J]. 馬淑慧,王海芳,劉金連,霍雪萍,趙向絨,曹情雯,劉勤社.  中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2016(03)
[6]牛腸道病毒2型單克隆抗體的制備及其應(yīng)用研究[J]. 郭金玉,張鶴曉,吳丹,高志強(qiáng),張冉,張樂(lè)萃.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(11)
[7]TNF-α在抗感染中的作用[J]. 華鋒,劉金輝.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2012(05)
[8]TNF-α在癌癥中的作用研究進(jìn)展[J]. 向春艷,何小燕,李逐波,劉衍季,賴翔宇.  生命科學(xué). 2012(03)
[9]肝癌組織中MIF、TNF-α的表達(dá)及臨床意義[J]. 陶斌勝,熊茂明,曹立宇.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2011(11)
[10]重組牛白細(xì)胞介素4的原核表達(dá)及其單克隆抗體研制[J]. 陳祥,張成全,徐正中,孟闖,黃金林,潘志明,焦新安.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2011(06)

碩士論文
[1]以TNF-α為靶點(diǎn)治療炎癥性腸病的研究進(jìn)展[D]. 方杰.蚌埠醫(yī)學(xué)院 2014
[2]內(nèi)臟脂肪素誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用機(jī)制及定心方的干預(yù)[D]. 崔小冰.南方醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3029170