本文以鴨源沙門氏菌作為研究對(duì)象,成功建立了以鴨源沙門氏菌裂解抗原為包被抗原的間接ELISA方法,并應(yīng)用于監(jiān)測(cè)鴨源沙門氏菌蜂膠滅活苗免疫鴨血清抗體的消長(zhǎng)變化,為疫苗質(zhì)量的評(píng)估和制定合理的免疫程序提供技術(shù)支持。試驗(yàn)以鴨源沙門氏菌超聲波裂解物為包被抗原,經(jīng)ELISA各反應(yīng)條件的優(yōu)化,包括反應(yīng)板均一性測(cè)定,羊抗鴨IgG-HRP工作濃度的篩選,抗原最適包被濃度和血清最佳稀釋度的選擇,抗原包被時(shí)間篩選,封閉時(shí)間的篩選,陰、陽(yáng)性血清反應(yīng)時(shí)間的篩選,酶標(biāo)二抗的作用時(shí)間的篩選,底物顯色時(shí)間的篩選,確定了間接ELISA操作程序：裂解抗原稀釋20倍（19.51μg/ml）37℃包被2h；1%牛血清白蛋白封閉液37℃封閉1 h；待測(cè)血清（待測(cè)抗體）稀釋200倍37℃與裂解抗原作用1h；酶標(biāo)二抗稀釋400倍,37℃作用1h；37℃避光顯色15 mmin；避光加入終止液2 mol/L H2SO4,終止反應(yīng)；酶聯(lián)儀檢測(cè)OD450值,判定結(jié)果陰陽(yáng)性,成功建立了檢測(cè)鴨源沙門氏菌抗體的間接ELISA方法；通過(guò)特異性試驗(yàn)、敏感性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn),結(jié)果表明對(duì)鴨瘟病毒、鴨肝炎病毒、鴨疫里默氏桿菌、鴨大腸桿菌、葡萄球菌、腺病毒的... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 沙門氏菌簡(jiǎn)介
        1.1 生物學(xué)特性
        1.2 沙門氏菌的危害
    2 沙門氏菌檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
        2.1 常規(guī)檢測(cè)方法
        2.2 分子生物學(xué)方法
        2.3 免疫學(xué)方法
        2.4 核酸探針技術(shù)
        2.5 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增LAMP
        2.6 其他檢測(cè)方法
    3 ELISA法鴨常見(jiàn)細(xì)菌、病毒抗體的檢測(cè)
        3.1 常見(jiàn)致病性病毒抗體的ELISA檢測(cè)方法
        3.2 常見(jiàn)致病性細(xì)菌抗體的ELISA檢測(cè)方法
    4 本研究的目的與意義
第二章 間接ELISA檢測(cè)鴨源沙門氏菌抗體方法的建立與應(yīng)用
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)菌株
        1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑及配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 沙門氏菌菌體裂解抗原制備
        2.2 陰性和陽(yáng)性血清制備
        2.3 間接ELISA最佳工作條件篩選
        2.4 間接ELISA操作步驟
        2.5 特異性試驗(yàn)
        2.6 敏感性試驗(yàn)
        2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
        2.8 建立的間接ELISA法監(jiān)測(cè)沙門氏菌疫苗免疫鴨血清抗體的消長(zhǎng)變化
    3 結(jié)果
        3.1 間接ELISA最佳工作條件的確定
        3.2 間接ELISA操作程序
        3.3 特異性試驗(yàn)
        3.4 敏感性試驗(yàn)
        3.5 重復(fù)性試驗(yàn)
        3.6 建立的間接ELISA法監(jiān)測(cè)沙門氏菌疫苗免疫鴨血清抗體的消長(zhǎng)變化
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]熒光定量RT-PCR檢測(cè)沙門氏菌方法的建立[J]. 楊柳,蘇明權(quán),馬越云,焦剛,常亮,肖鳳靜,李明,彭年才,郝曉柯.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2011(01)

碩士論文
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[2]LAMP技術(shù)檢測(cè)肉及肉制品中沙門氏菌的研究[D]. 王羽.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]食品中沙門氏菌分子檢測(cè)靶點(diǎn)的篩選與評(píng)價(jià)[D]. 向雪菲.上海交通大學(xué) 2008
[4]豬沙門氏菌的臨床分離鑒定及耐藥性消除研究[D]. 賈愛(ài)卿.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[5]耐氟喹諾酮類藥物豬源致病性沙門氏菌gyrA基因PCR-RFLP及序列分析[D]. 譚炳乾.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002



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