為了研制新型、有效的豬流行性腹瀉病毒（PEDV）疫苗,本研究以乙肝核心抗原蛋白（HBcAg）作為多表位免疫原的載體蛋白,將PEDV S蛋白中的3個(gè)B細(xì)胞表位基因與S1截短序列基因串聯(lián)后,插入到編碼HBcAg的免疫顯性區(qū)的基因中,構(gòu)建重組質(zhì)粒HBcAg-PE,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3）中進(jìn)行表達(dá)。重組蛋白HBPE經(jīng)過純化和Western-blot鑒定后,以不同劑量的重組蛋白通過肌肉注射途徑免疫BALB/c小鼠,對(duì)其免疫效果進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,重組蛋白HBPE在BL21（DE3）中以沉淀形式表達(dá),純化、復(fù)性后的重組蛋白HBPE能夠與PEDV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。重組蛋白HBPE能夠刺激小鼠產(chǎn)生抗PEDV特異性抗體,同時(shí)可以產(chǎn)生相關(guān)的Th1型和Th2型細(xì)胞因子。上述結(jié)果表明,本研究成功構(gòu)建了PEDV重組B細(xì)胞復(fù)合表位抗原HBPE,并在小鼠模型中初步評(píng)價(jià)了其免疫原性,為今后新型PEDV基因工程疫苗的研制提供了新的思路。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒HBPE的雙酶切鑒定Figure1IdentificationofrecombinantplasmidHBPEby250bp100bp

：HBPE純化后復(fù)性產(chǎn)物。M：Proteinmolecularweightstandard；1：Therefoldedproductofpuri-fiedHBPE.圖3HBPE表達(dá)鑒定的SDS-PAGE分析Figure3SDS-PAGEanalysisoftherecombinantproteinHBPEM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：未誘導(dǎo)對(duì)照；2：HBPE過夜誘導(dǎo)；3：菌體超聲破碎后上清；4：菌體超聲破碎后沉淀。M：UnstainedproteinmolecularweightMarker；1：HBPEwithoutin-duction；2：HBPEatovernightbyinduced；3：Supernatantafterultra-sonicfragmentationofHBPE；4：Precipitationafterultrasonicfragmen-tationofHBPE.圖2陽性表達(dá)菌株的篩選Figure2ScreeningofpositiveexpressionstrainsM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1、2：?jiǎn)慰寺【暾T導(dǎo)表達(dá)；3：未誘導(dǎo)對(duì)照。M：UnstainedproteinmolecularweightMarker；1，2：Inducedexpressionofmonoclonalmtrains；3：Unconditionedcontrol.純度可達(dá)到85％以上，質(zhì)量濃度約為0.5mg/mL。2.5目的蛋白的Western-blot檢測(cè)Western-blot檢測(cè)結(jié)果（圖5）顯示，純化復(fù)性后的蛋白HBPE可以和PEDV陽性血清發(fā)生良好反應(yīng)。2.6特異性抗體的ELISA檢測(cè)ELISA檢測(cè)結(jié)果（圖6）顯示，重組抗原HBPE和商品化滅活疫苗經(jīng)左后腿肌內(nèi)首次免疫小鼠后，2周內(nèi)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗PEDV特異性抗體，首次免疫后第14天加強(qiáng)免疫，產(chǎn)生的抗PEDV特異性抗體水平明顯升高。整個(gè)過程中，免疫滅活疫苗組的抗體水平最高，于首次免疫后第21天與其他組均產(chǎn)生顯著差異（P＜0.01），PE25組和PE50組抗體水平于首次免疫后第21天后顯著高于陰性對(duì)照PBS免疫組（P＜0.01），PE25組和PE50組之間抗體水平無差異，整個(gè)過程中，PBS組并未檢測(cè)到抗PEDV特異性抗體。2.7細(xì)胞因子的檢測(cè)情況為了進(jìn)一步檢測(cè)免疫小鼠產(chǎn)生的免疫應(yīng)答的94ku66.2ku45ku33ku

HBPE表達(dá)鑒定的SDS-PAGE分析


本文編號(hào)：3025001