為了研制新型、有效的豬流行性腹瀉病毒（PEDV）疫苗,本研究以乙肝核心抗原蛋白（HBcAg）作為多表位免疫原的載體蛋白,將PEDV S蛋白中的3個B細胞表位基因與S1截短序列基因串聯(lián)后,插入到編碼HBcAg的免疫顯性區(qū)的基因中,構建重組質(zhì)粒HBcAg-PE,并轉化至大腸桿菌BL21（DE3）中進行表達。重組蛋白HBPE經(jīng)過純化和Western-blot鑒定后,以不同劑量的重組蛋白通過肌肉注射途徑免疫BALB/c小鼠,對其免疫效果進行了初步評價。結果顯示,重組蛋白HBPE在BL21（DE3）中以沉淀形式表達,純化、復性后的重組蛋白HBPE能夠與PEDV陽性血清發(fā)生特異性反應。重組蛋白HBPE能夠刺激小鼠產(chǎn)生抗PEDV特異性抗體,同時可以產(chǎn)生相關的Th1型和Th2型細胞因子。上述結果表明,本研究成功構建了PEDV重組B細胞復合表位抗原HBPE,并在小鼠模型中初步評價了其免疫原性,為今后新型PEDV基因工程疫苗的研制提供了新的思路。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學. 2020,50(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒HBPE的雙酶切鑒定Figure1IdentificationofrecombinantplasmidHBPEby250bp100bp

：HBPE純化后復性產(chǎn)物。M：Proteinmolecularweightstandard；1：Therefoldedproductofpuri-fiedHBPE.圖3HBPE表達鑒定的SDS-PAGE分析Figure3SDS-PAGEanalysisoftherecombinantproteinHBPEM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標準；1：未誘導對照；2：HBPE過夜誘導；3：菌體超聲破碎后上清；4：菌體超聲破碎后沉淀。M：UnstainedproteinmolecularweightMarker；1：HBPEwithoutin-duction；2：HBPEatovernightbyinduced；3：Supernatantafterultra-sonicfragmentationofHBPE；4：Precipitationafterultrasonicfragmen-tationofHBPE.圖2陽性表達菌株的篩選Figure2ScreeningofpositiveexpressionstrainsM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標準；1、2：單克隆菌株誘導表達；3：未誘導對照。M：UnstainedproteinmolecularweightMarker；1，2：Inducedexpressionofmonoclonalmtrains；3：Unconditionedcontrol.純度可達到85％以上，質(zhì)量濃度約為0.5mg/mL。2.5目的蛋白的Western-blot檢測Western-blot檢測結果（圖5）顯示，純化復性后的蛋白HBPE可以和PEDV陽性血清發(fā)生良好反應。2.6特異性抗體的ELISA檢測ELISA檢測結果（圖6）顯示，重組抗原HBPE和商品化滅活疫苗經(jīng)左后腿肌內(nèi)首次免疫小鼠后，2周內(nèi)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗PEDV特異性抗體，首次免疫后第14天加強免疫，產(chǎn)生的抗PEDV特異性抗體水平明顯升高。整個過程中，免疫滅活疫苗組的抗體水平最高，于首次免疫后第21天與其他組均產(chǎn)生顯著差異（P＜0.01），PE25組和PE50組抗體水平于首次免疫后第21天后顯著高于陰性對照PBS免疫組（P＜0.01），PE25組和PE50組之間抗體水平無差異，整個過程中，PBS組并未檢測到抗PEDV特異性抗體。2.7細胞因子的檢測情況為了進一步檢測免疫小鼠產(chǎn)生的免疫應答的94ku66.2ku45ku33ku

HBPE表達鑒定的SDS-PAGE分析


本文編號：3025001