為篩選出具有廣譜抗豬傳染性胸膜肺炎作用的疫苗候選分子,本研究利用PCR技術(shù)從血清1型豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌（App）基因組克隆外膜蛋白（Omp）lola基因。經(jīng)生物信息學(xué)分析顯示,App lola基因由633 bp組成,編碼210個(gè)氨基酸,不同的血清型之間具有很高的同源性。將App lola克隆至pET-32a（+）,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,表達(dá)重組蛋白rLOLA。取4周齡小鼠60只,隨機(jī)分為6組,分別于0、2、4周經(jīng)皮下免疫:弗氏不完全佐劑（IFA）+10μg rLOLA（低劑量組）、IFA+30μg rLOLA（中劑量組）、IFA+50μg rLOLA（高劑量組）、30μg rLOLA（rLOLA組）、IFA（對(duì)照組）和生理鹽水（對(duì)照組）。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,第3次免疫接種后相較于對(duì)照組（IFA組和生理鹽水組）,實(shí)驗(yàn)組小鼠血清IgG水平均明顯升高,尤以高劑量組小鼠（IFA+50μg rLOLA）更顯著（p<0.01）。于第3次免疫后2周,利用10×LD50 App對(duì)小鼠腹腔注射攻毒,5 d后對(duì)照組小鼠全部死亡,30μg rLOLA、IFA+50μg rLOLA、IFA+30μg ... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.3 App lola基因的克隆及序列分析
    1.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.5 重組蛋白的表達(dá)、純化與鑒定
    1.6 小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)
    1.7 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 App lola基因的克隆及序列分析
    2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    2.3 rLOLA的表達(dá)與鑒定
    2.4 小鼠特異性IgG抗體檢測(cè)及免疫效力試驗(yàn)結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血清1和3型多殺性巴氏桿菌鐵調(diào)控外膜蛋白共同抗原的初步分析[J]. 余旭平,鄔棟棟,劉曉寧,胡東建,杜鑫,陳玉銀.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(02)
[2]豬傳染性胸膜肺炎重組亞單位疫苗保護(hù)效果的評(píng)價(jià)及其免疫機(jī)制的研究[J]. 王勇,劉思國(guó),王春來(lái),邵美麗,宮強(qiáng),劉建東,遲磊,趙昆,郭設(shè)平,李廣興.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2006(12)



本文編號(hào)：3024865