牛腸道病毒（Bovine enterovirus,BEV）感染是臨床上以消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)病癥為特征的傳染病,給養(yǎng)牛業(yè)造成了較為嚴重的經(jīng)濟損失。目前,國內(nèi)許多地區(qū)報道有該病的暴發(fā)。由于本病在國內(nèi)為新發(fā)傳染病,有關(guān)該病的發(fā)病機理及病毒與宿主細胞間的互作等方面缺乏研究。本研究應用酵母雙雜交技術(shù),以腸道病毒HY12毒株的結(jié)構(gòu)蛋白VP1構(gòu)建重組質(zhì)粒,表達誘餌蛋白,通過篩選及鑒定與VP1互作的宿主蛋白,探究病毒與宿主蛋白之間的相互作用,以期確定VP1蛋白在病毒入侵機體過程中的功能,為最終闡明腸道病毒感染機制奠定基礎(chǔ)。為篩選E種腸道病毒HY12毒株編碼的VP1蛋白的宿主互作蛋白,本實驗應用PCR技術(shù)擴增出HY12病毒VP1蛋白基因的完整序列,并將其克隆到酵母載體pGBKT7中,構(gòu)建重組誘餌質(zhì)粒pGBKT7-VP1。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母菌株AH109中,通過對比重組質(zhì)粒組和空白質(zhì)粒組不同時間點的OD₆₀₀值,檢測其對酵母細胞的毒性,并把含有誘餌重組質(zhì)粒的酵母菌涂布在缺陷型培養(yǎng)基上驗證其自激活活性。將轉(zhuǎn)有誘餌載體的AH109菌株與表達酵母雙雜交MDBK細胞cDNA文庫的Y187菌... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
引言
第一章 文獻綜述
    1 腸道病毒研究進展
    2 酵母雙雜交系統(tǒng)研究進展
第二章 酵母雙雜交系統(tǒng)篩選HY12株VP1的宿主互作蛋白
    2.1 材料
    2.2 方法
    2.3 結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 HY12株VP1與PAK1和ACTG1 相互作用的驗證
    3.1 材料
    3.2 方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導師簡介
作者簡介
致謝



本文編號：3023492