牛腸道病毒（Bovine enterovirus,BEV）感染是臨床上以消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)病癥為特征的傳染病,給養(yǎng)牛業(yè)造成了較為嚴重的經濟損失。目前,國內許多地區(qū)報道有該病的暴發(fā)。由于本病在國內為新發(fā)傳染病,有關該病的發(fā)病機理及病毒與宿主細胞間的互作等方面缺乏研究。本研究應用酵母雙雜交技術,以腸道病毒HY12毒株的結構蛋白VP1構建重組質粒,表達誘餌蛋白,通過篩選及鑒定與VP1互作的宿主蛋白,探究病毒與宿主蛋白之間的相互作用,以期確定VP1蛋白在病毒入侵機體過程中的功能,為最終闡明腸道病毒感染機制奠定基礎。為篩選E種腸道病毒HY12毒株編碼的VP1蛋白的宿主互作蛋白,本實驗應用PCR技術擴增出HY12病毒VP1蛋白基因的完整序列,并將其克隆到酵母載體pGBKT7中,構建重組誘餌質粒pGBKT7-VP1。將重組質粒轉化到酵母菌株AH109中,通過對比重組質粒組和空白質粒組不同時間點的OD₆₀₀值,檢測其對酵母細胞的毒性,并把含有誘餌重組質粒的酵母菌涂布在缺陷型培養(yǎng)基上驗證其自激活活性。將轉有誘餌載體的AH109菌株與表達酵母雙雜交MDBK細胞cDNA文庫的Y187菌... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
引言
第一章 文獻綜述
    1 腸道病毒研究進展
    2 酵母雙雜交系統(tǒng)研究進展
第二章 酵母雙雜交系統(tǒng)篩選HY12株VP1的宿主互作蛋白
    2.1 材料
    2.2 方法
    2.3 結果
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 HY12株VP1與PAK1和ACTG1 相互作用的驗證
    3.1 材料
    3.2 方法
    3.3 結果
    3.4 討論
    3.5 小結
結論
參考文獻
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作者簡介
致謝



本文編號：3023492